【摘 要】
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目的：获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为人兽共患的弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。 方法：以PCR法扩增弓形虫多表位基因(MEG),使其两
【机 构】
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第一军医大学南方医院实验动物研究中心,广州,510515
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目的：获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为人兽共患的弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。
方法：以PCR法扩增弓形虫多表位基因(MEG),使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导,以SDS-PAGE对该基因的表达水平、表达产物的可溶性、分子量进行分析和鉴定,以WESTERN-BLOT分析表达产物的免疫反应性。
结果：该基因在原核表达系统中经诱导,得到了31kDa的可溶性融合表达产物。其在菌体总蛋白中所占的比例为58％,经Ni-NTA纯化,纯度可达95％以上.免疫印迹实验表明该产物能够被弓形虫B36感染的小鼠血清和弓形虫RH感染的兔血清特异识别。
结论：弓形虫多表位基因在原核中的可溶性表达产物在弓形虫病诊断及疫苗研究中有潜在的应用价值。
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