扩增牛结核分枝杆菌esat6和cfp10基因,利用大肠杆菌表达系统表达目的蛋白,经鉴定纯化后用于牛结核病检测,为牛结核病检测的特异性抗原研究奠定基础。本研究以牛分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增esat6和cfp10基因,构建重组表达载体pET-32a(+)-esat6和pET-32a(+)-cfp10,通过原核表达系统分别表达重组esat6和cfp10蛋白,经NiNTA亲和层析法纯化后,对目的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot法验证；BCA法测定目的蛋白浓度,最后将east6和cfp10蛋白混合后用于牛结核病临床检测,并对检测数据进行分析。结果显示牛分枝菌esat6和cfp10蛋白在大肠杆菌系统中获得高效表达；其混和蛋白应用与结核病检测具有较高的特异性,且在皮肤变态反应和IFN-γ释放试验两种检测方法中具有较高的符合率。本研究表明相较于提纯结核菌素(PPD),esat6和cfp10混和蛋白具有较高的特异性和稳定性,将有希望替代PPD用于结核病检测。