新型前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗的制备和安全性研究

来源 :2015诺贝尔奖获得者医学峰会暨国际肿瘤研究高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:oihvhuhuiuiui
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  目的 依据小分子吲哚菁绿中的含硫活性基团能与大分子利妥昔单抗中的自由氨基相结合(主要为赖氨酸的ε-氨基)的偶联反应原理,制备新型前哨淋巴结示踪剂吲哚菁绿-利妥昔单抗,并对其体外特性及体内应用的安全性进行评价.方法 在室温、中性环境条件下,使用10 mg/ml利妥昔单抗溶液与2.5 mg/ml吲哚菁绿溶液,将利妥昔单抗和吲哚菁绿按4∶1的质量比混匀,通过直接偶联反应制备吲哚菁绿-利妥昔单抗偶联物,之后对制备的偶联物进行离心、过滤、透析.采用8%非还原型SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法,以利妥昔单抗为阳性对照,检测偶联物的分子完整性;采用双抗体夹心间接酶联免疫荧光分析法及流式细胞术检测偶联物的免疫活性.将偶联物移入含有10%胎牛血清培养液的RPMI 1640细胞培养基中,在37℃下培养1周,进行偶联物的细菌检测.取相当于人体局部注射用量10倍与100倍的偶联物于20只无菌级小鼠前肢足垫皮下进行注射,观察4个周后确定偶联物的急性毒性反应,然后处死并解剖小鼠,采用高效液相色谱法检测肝、肾脏器组织的偶联物残留.
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