【摘 要】
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限制性DNA内切酶是基因工程和分子生物学研究中不可或缺的工具酶。市场上的限制性DNA内切酶大多是在大肠杆菌表达、分离和纯化得到的,但是有一部分是无法在大肠杆菌中表达,因
【机 构】
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吉林省农业科学院农业生物技术研究所; 吉林师范大学生命科学学院;
【基金项目】
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吉林省农业科技创新工程(编号：CXGC2017TD004)~~
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限制性DNA内切酶是基因工程和分子生物学研究中不可或缺的工具酶。市场上的限制性DNA内切酶大多是在大肠杆菌表达、分离和纯化得到的,但是有一部分是无法在大肠杆菌中表达,因此是直接从发现这些酶的原始宿主菌中直接提取和纯化的,这些酶通常需要定制,因此供货周期长,价格昂贵。植物瞬时表达系统是高效表达外源蛋白的一种表达系统,可以形成多种修饰和二级(三级)结构,从而保证重组蛋白的生物活性。本研究首先以烟草花叶病毒(TMV)为瞬时表达载体,以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,分别从生长条件、侵染时机、侵染方法,农杆菌的浓度和侵染时间等四个方面在普通烟草(Nicotiana babacum)和本氏烟草(N. benthamiana)中优化了表达条件。在此基础上,我们把按照烟草密码子偏好性进行优化的来自念珠菌(Candidatus Uhrbacteria)的限制性DNA内切酶Pac I基因PacIR在上述优化的条件下进行了表达。SDS-PAGE和Western分析结果表明,目标蛋白的到了表达;初步的活性分析表明,获得的重组Pac I具有限制性DNA酶切酶活性。进一步的分离纯化和活性分析正在进行中。
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