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Gene expression profiling reveals distinct features of various porcine adipose tissues
【机 构】
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Institute of Animal Genetics and Breeding, College of Animal Science and Technology, Sichuan Agricul
【出 处】
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第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会
【发表日期】
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2013年5期
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本研究利用Tet-on系统构建毛囊特异性的LEF1表达载体，调节和控制LEFT基因在绒山羊胎儿成纤维细胞中的表达，为今后转基因绒山羊新品种的培育提供基础数据。本研究获得了转染pcDNA4-KL表达载体后稳定整合LEF1基因的转基因绒山羊成纤维细胞克隆。己有的研究结果证明，KAP6.1启动子不仅能在毛囊细胞中特异性表达，在成纤维细胞中也有转录和表达活性。本研究经过筛选和诱导表达试验，初步证明了四环素
水牛是一个重要物种,其H1基因有维持染色体结构和调节基因表达等重要作用,H1c亚型很可能是体细胞核重编程中一个重要基因.因此本文研究了干扰H1c对水牛体细胞增殖和生长的影响,通过qPCR验证了构建的3个干扰载体都能有效扰低水牛体细胞HIc基因表达，并通过脂质体介导法将载体转入水牛胎儿皮肤成纤维细胞，从而扰低细胞HIc基因的表达，结果表明扰低Hlc基因表达能影响细胞的正常分裂和生长，甚至导致细胞死亡
本文利用绵羊KAP6-1启动子构建毛囊特异性表达Cre酶的真核表达载体,为利用Cre/LoXP系统删除目的基因提供条件.研究表明：表达载体pIRES2-KAP6.1-Cre-EGFP可以在毛囊细胞中特异性表达Cre酶，进而利用Cre/LoxP系统在毛囊细胞中条件性删除阻遏毛囊生长周期的调控基因，促进毛囊发育及延长生长期，培育高转基因动物的产绒量。
本研究建立了酵母细胞水平直接筛选活性锌指核酸酶系统，为特异锌指核酸酶的直接获得提供了一种新的快捷方法。针对奶山羊alpha S1 casein基因，利用此系统筛选的活性锌指核酸酶实现了内源靶基因的高效敲除。阳性克隆的富集和获得是转基因技术的难点之一，在无报告系统的富集作用时，未检测到阳性克隆，相反，在嘌呤霉素抗性基因报告系统的富集作用下，阳性克隆高达15.9％。本文首次利用嘌呤霉素抗性基因的报告系
本研究从选择毛囊特异性启动子和选择性删除标记基因入手,克隆毛囊特异性表达的人表皮角蛋白14基因启动子,引入Cre/LoxP基因敲除系统构建毛囊特异性表达VEGF164基因及选择性删除标记基因的条件打靶载体pCDsRed2-K14VL,筛选、鉴定转基因细胞克隆,获得稳定转染毛囊特异性表达外源VEGF164基因及可通过Cre酶删除标记基因的核移植细胞供体.
分别取转MR-1、pBMP4基因和pMR-1+pBMP4双基因小鼠的股二头肌和股四头肌组织进行肌纤维密度和直径测定、形态显微观察分析,为研究pMR-1基因和pBMP4基因调控肌肉纤维生长发育的作用,进而为转基因猪的制作提供参考数据.
在转基因克隆羊的研制过程中,如何提高存活克隆羊的出生效率是研究人员所关心的核心问题.而影响核移植受体妊娠及克隆胎儿的出生的因素有很多,其中每个受体移植的胚胎数量是很重要的一个因素.本文主要研究在转基因克隆羊的制备过程中,受体的胚胎移植数量对于其后的妊娠和产羔的影响.结果表明:在转基因克隆制备实验中,如果要进行1细胞期的胚胎移植,那么移植的数量应该在8-9枚比较好,具体情况还应视供核细胞支持胚胎发育
为了诱导形成牛iPS细胞用于深入研究和应用,试验直接采用慢病毒作为诱导材料感染牛胎儿成纤维细胞,并对诱导形成的细胞集落进行检测分析.结果显示,慢病毒介导的EGFP在牛胎儿成纤维细胞中稳定和高效表达,在含有LIF和bFGF的DMEM细胞培养液中,部分牛胎儿成纤维细胞逐渐改变纤维状形态,并形成圆形细胞,细胞逐步增殖形成细胞集落,接种细胞集落于饲养层上,细胞集落生长迅速,集落与饲养层间界限明显,集落生长
采取羔羊的子叶、脐带、尾部组织,死羊的全身组织以及活羊的肌肉组织,用Follistatin N+D1基因特异性引物进行PCR检测,同时,对慢病毒载体的CMV启动子、LTR基因进行PCR检测;并对死羊的全身组织以及活羊的肌肉组织作RT-PCR检测.结果显示初生转基因羔羊目的基因PCR检测采用尾部组织为佳;进一步的RT-PCR检测同时验证了目标基因的转录,对慢病毒相关元件的检测为转基因动物的安全性考察
本文使用VITEK2 Compact全自动微生物分析鉴定仪和16SrRNA相结合的方法对暗腹雪鸡胃肠道(嗉囊、腺胃、十二指肠、回肠、盲肠)的3种菌群(大肠杆菌、葡萄球菌、肠球菌)进行测定,探讨暗腹雪鸡消化道菌群的分布规律.结果:3种菌群在盲肠内分布最多,其次为嗉囊,十二指肠;胃肠道内三种菌占比例从大到小依次为肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌.