【摘 要】
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采用体外细胞培养的方法,用不同浓度的脱氧胆酸(DCA)处理SHSY-5Y细胞,用MTT 法检测细胞存活率；通过AO/EB、Hoechst 染色用荧光显微镜进行形态学观察；划痕实验探究DCA 对细胞迁移的影响；通过不同荧光染色的流式细胞术来检测DCA 作用后细胞周期的分布、活性氧含量和以及细胞凋亡率；通过Western Blot 和RT-PCR 检测DCA 处理后相关蛋白和基因的表达变化情况探讨DC
【机 构】
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河南城建学院 生命科学与工程学院,平顶山467036 厦门大学,生命科学学院,厦门 361000
【出 处】
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中国环境诱变剂学会风险评价专业委员会第二十届全国学术交流会议
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采用体外细胞培养的方法,用不同浓度的脱氧胆酸(DCA)处理SHSY-5Y细胞,用MTT 法检测细胞存活率；通过AO/EB、Hoechst 染色用荧光显微镜进行形态学观察；划痕实验探究DCA 对细胞迁移的影响；通过不同荧光染色的流式细胞术来检测DCA 作用后细胞周期的分布、活性氧含量和以及细胞凋亡率；通过Western Blot 和RT-PCR 检测DCA 处理后相关蛋白和基因的表达变化情况探讨DCA 作用的分子机制.结果 表明,DCA 作用能够抑制SHSY-5Y 细胞株的增殖,可以促进细胞乳酸脱氢酶的释放,可以使细胞形成克隆能力下降.通过形态学观察,发现细胞呈现出细胞变圆皱缩、细胞核染色质浓缩、细胞核碎裂形成凋亡小体等凋亡特征性的形态学现象.划痕实验表明,DCA 作用下,细胞迁移能力降低.流式细胞仪检测细胞周期分布、细胞凋亡率、活性氧含量结果显示,经DCA 诱导处理48 h 后,细胞周期在G2/M 期所占比例显著增多,细胞凋亡率明显增大,细胞内活性氧增加,均表现为浓度依赖性.0.8 mmol/L DCA 处理48 h 后SHSY-5Y 处于G2/M 期细胞由10.0＃提升到41.5＃,细胞凋亡率由1.46＃提升至51.81＃.Western blot 和RT-PCR 结果显示,在DCA 作用下,p21、p53、Bax 等相关抑癌基因表达水平上调,Bcl-2、Akt 等相关致癌基因表达水平下调,CDK1、Cylin B1等周期蛋白表达量下降.从而我们可以得出基本结论,DCA 作用下,通过影响p21、p53、CDK1、Cylin B1 等相关因子的表达,可以将细胞周期阻滞在G2/M 期；通过影响Bcl-2、Bax、Akt 等蛋白的表达量进而导致线粒体膜电位下降,膜通透性增加,进而释放Cyt c 到胞浆,与胞浆内Apaf1 结合,各因子之间级联反应放大凋亡效应,下游凋亡执行者Caspase 被激活,引起SHSY-5Y 细胞凋亡.综上所述,DCA 可以显著抑制神经母瘤细胞SHSY-5Y 增殖,并呈浓度依赖关系；DCA 处理后,使细胞周期被阻滞在G2/M 期,并经线粒体途径诱导细胞凋亡.
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