【摘 要】
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目的 :探讨沙眼衣原体pORF5质粒蛋白是否通过激活Nrf2/HO-1信号通路调控细胞凋亡,并分析其分子机制,为进一步阐明沙眼衣原体致病机制提供实验依据。方法 :IPTG诱导pGEX-6p/pORF5转化菌表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经PreScission Protease剪切GST标签,制备pORF5质粒蛋白;以不同浓度的pORF5蛋白（3～12μg/ml）、不同时间（4～16h）
【机 构】
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南华大学衡阳医学院病原生物学研究所
【出 处】
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第十三届全国免疫学学术大会摘要汇编
论文部分内容阅读
目的 :探讨沙眼衣原体pORF5质粒蛋白是否通过激活Nrf2/HO-1信号通路调控细胞凋亡,并分析其分子机制,为进一步阐明沙眼衣原体致病机制提供实验依据。方法 :IPTG诱导pGEX-6p/pORF5转化菌表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经PreScission Protease剪切GST标签,制备pORF5质粒蛋白;以不同浓度的pORF5蛋白（3～12μg/ml）、不同时间（4～16h）刺激HeLa细胞,间接免疫荧光分析Nrf2核转位情况,western blot分析HO-1的表达;HeLa分别经HO-1siRNA、Nrf2siRNA预处理6h后,westernblot分别分析各组细胞中HO-1、Bax与Bcl-2的表达情况,流式细胞计数测定细胞凋亡率。结果 :pORF5蛋白呈浓度依赖性和时间依赖性促进HeLa细胞HO-1蛋白的表达,pORF5浓度为9μg/ml时,HO-1的表达达到峰值,刺激时间为12h时,HO-1的表达量最高;pORF5蛋白能促进Nrf2发生核转位;Nrf2基因沉默后,HO-1表达水平降低,Nrf2核转位减少,Bax/Bcl-2比值增加,并逆转pORF5的凋亡抑制作用;HO-1siRNA敲低HO-1表达后,Bax表达量较对照组升高31%,Bcl-2表达量降低88%,Bax/Bcl-2较对照组明显增加,细胞凋亡率较对照组显著增加（P <0.01）。结论 :沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制细胞凋亡。
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