【摘 要】
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目的:随着世界范围内实验动物领域"3R"运动,即"减少（reduction）、优化（refinement）、替代（replacement）的兴起,动物替代法的研究与应用具有深远的意义。为了解具有美白功能的灯盏花甲醇提取物的眼刺激作用,采用体外替代方法探讨是否存在眼刺激性,完善其安全性评价的工作。方法:受精鸡卵尿囊绒膜试验（HET-CAM）:普通级受精鸡卵（第0日）,购于四川某原种鸡场。孵育条件温度
【出 处】
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中国科学技术协会第十届年会21分会场论文汇编
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目的:随着世界范围内实验动物领域"3R"运动,即"减少（reduction）、优化（refinement）、替代（replacement）的兴起,动物替代法的研究与应用具有深远的意义。为了解具有美白功能的灯盏花甲醇提取物的眼刺激作用,采用体外替代方法探讨是否存在眼刺激性,完善其安全性评价的工作。方法:受精鸡卵尿囊绒膜试验（HET-CAM）:普通级受精鸡卵（第0日）,购于四川某原种鸡场。孵育条件温度（37.5±0.5）℃;相对湿度约为（62.5±1.5）%。鸡蛋气室端向上,每小时进行自动翻转（防止粘连,提高胚胎存活率）,从孵育第5天起光照检查,剔除不存活的鸡蛋,孵至第10天开始试验。解剖显微镜观察受试物作用5分钟内的CAM的损伤情况。根据CAM上血管变化（充血、出血、凝血）的初始时间（秒）记录评分。绒毛膜尿囊膜苔盼篮染色试验（CAM-TBS）:显微镜观察结束后,立即用0.1%的苔盼蓝磷酸缓冲液（pH=7.4）作用于CAM1min,冲去过量的染料。甲酰胺3mL萃取染色的膜用,萃取物液用分光光度计在595nm处测定A595。计算苔盼蓝含量。刺激量设10%和50%提取物原粉和原粉（以生理盐水作溶剂）,阳性对照为10%TritonX-100。每个剂量设3个平行鸡胚,实验重复3次。结果:阳性对照物10%TritonX-100为强刺激性,灯盏花甲醇提取物原粉在HET-CAM和CAM-TB检测结果中均判为轻刺激性,50%原粉在HET-CAM中判为轻刺激性而在CAM-TB中判为无刺激性。其它受试物组均为无刺激性。结论:受精鸡卵尿囊绒膜试验（HET-CAM）和绒毛膜尿囊膜苔盼篮染色试验（CAM-TBS）较传统作为传统Draize test更为敏感。两种方法作为眼刺激试验的体外替代方法已广泛应用于化妆品原料的评价。但是CAM试验方法还需要完善,如评分的规范性和客观性等,以及与整体生物反应的一致性等问题有待进一步研究。
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