【摘 要】
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目的：气相色谱/燃烧炉/同位素比质谱(GC/C/IRMS)分析是在兴奋剂检测中检测内源性类固醇兴奋剂的法定方法,但目前该方法存在灵敏度较低、操作繁琐等问题.国际上一些兴奋剂
【机 构】
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国家体育总局反兴奋剂中心 100029
【出 处】
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2010年中国运动生理生化学术会议
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目的：气相色谱/燃烧炉/同位素比质谱(GC/C/IRMS)分析是在兴奋剂检测中检测内源性类固醇兴奋剂的法定方法,但目前该方法存在灵敏度较低、操作繁琐等问题.国际上一些兴奋剂检测实验室应用此检测方法进行检测时,样品前处理方法不仅相同.但是具备此检测能力的实验室检测方法中一般均有C18纯化,碱化萃取等步骤.本研究目的在于对于内源性类固醇兴奋剂常规检测的同位素比质谱分析前处理方法进行合理的改进,提高灵敏度.方法：采用固相提取的样品制备：精密吸取尿样6份各2mL,分别精密加入甲基睾酮内标溶液50μL,加至预处理后的C18小柱上,待尿样流过柱后,用5mL蒸馏水洗脱,弃去水洗部分.再用2mL甲醇洗脱,甲醇洗脱液经旋转蒸发仪蒸干后,加入pH=7.0的磷酸盐缓冲液1mL和β-葡萄糖醛酸甙酶溶液(5000 IU) 100μL混匀,在55℃恒温水浴中酶解3hr.取出后加入0.5mLpH值为9.6的碳酸盐缓冲液碱化,加入5mL叔丁基甲醚振荡萃取.离心,吸取上层有机溶液,在65℃加热下用氮气吹干,精密加入50μL TMS衍生化试剂溶解残渣,转入样品瓶中,封盖,70℃反应30min.备用.未采用固相提取的样品制备：上述方法中C18小柱处理部分省去,其余相同.样品按常规方法进行GC/MSD,及IRMS分析,采用内标法计算含量.检测目标物为An、Etio、5α-diol、5β-diol、T、ET.以处理后供试品溶液中目标物的含量及IRMS测定行为为指标,对数据统计分析,考察两种处理方法的差异性.结果：采用C-18柱固相提取后供试品中类固醇An,Etio,5α-diol,5β-diol,T,ET的含量均低于不采用固相提取供试品中的含量,t检验结果显示,两种处理方法所制备的供试品中类固醇的含量具有显著性差异.对于ET,P＜0.05；其余P＜0.01.结论：舍去C-18固相提取步骤可以提高待测物在供试液中的含量,减少损失,进而提高检测灵敏度.
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