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建立了多种抗菌药物中非法添加利巴韦林检测的UPLC-MS/MS方法。样品经乙腈提取稀释后,采用ACQUITY UPLC~RBEH amide色谱柱为分离柱,质谱正离子扫描分析测定。结果显示,利巴韦林在1~50ng/mL的范围内线性关系良好(R~2=0.9992);样品检出限为0.5 mg/g,定量限为2 mg/g。在40、50、60mg/g添加水平的回收率为90%~110%,批内批间变异系数均小于10%。本方法灵敏、快速、重现性好,适用于多种抗菌药物中非法添加利巴韦林的检测。