【摘 要】
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目的：探讨活性氧(ROS)对急性早幼粒细胞白血病(APL)分化的机制研究. 方法：对APL白血病细胞株NB4细胞维甲酸(ATRA)干预不同时间,荧光光度分光法检测细胞ROS的水平,通过加入RO
【机 构】
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中南大学湘雅医院儿科 长沙,10008
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目的：探讨活性氧(ROS)对急性早幼粒细胞白血病(APL)分化的机制研究.
方法：对APL白血病细胞株NB4细胞维甲酸(ATRA)干预不同时间,荧光光度分光法检测细胞ROS的水平,通过加入ROS抑制剂NAC或SOD1RNA干扰降低细胞内ROS水平,瑞氏染色观察细胞的分化成熟、流式细胞术检测CD11b表达及酶标仪检测细胞的NBT还原率;基因转染上调细胞内HMGB1表达,进一步检测HMGB1对细胞分化的影响;采用Western blot、免疫荧光和ELISA法,检测改变细胞内ROS水平对HMGB1细胞内移位的影响;Western blot和透射电镜检测HMGB1对细胞自噬的水平和PML/RARα蛋白降解的影响.最后,免疫共沉淀(Co-IP)法检测了HMGB1对P62/PML/RARα复合物的影响,及P62对HMGB1诱导PML/RARα蛋白降解急细胞分化的影响.
结果：ATRA干预NB4细胞后，细胞内ROS水平显著上升，且ROS抑制剂能显著降低细胞ROS水平;下调细胞内ROS水平能抑制NB4细胞的分化、CD11b的表达和NBT阳性细胞的还原率。
结论：化疗药物通过上调细胞内ROS的水平促进了APL细胞的分化成熟，HMGB1介导的自噬反应对P62/PML/RARa复合物的影响可能是其重要机制之一。
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