目的:研究脱细胞血管支架的快速高效的制备方法,对其进行力学性能及生物相容性的评价,用CD34抗体修饰脱细胞血管支架后,植入动物体内募集循环中的内皮袒细胞参与再内皮化,找到一种更接近现实应用的组织工程血管。方法 :新鲜的羊颈动脉、前肢动脉经-80℃冷冻、37℃水浴复温,反复冻融3次,在5000大气压(atm)4℃条件下超高压处理20min,0.125%十二烷基硫酸钠溶液(SDS)中,37℃振摇(100r/min)12h,彻底去除细胞后,进行苏木精-伊红染色、Masson三染色、扫描电镜及生物力学测定研究其组织结构的变化,荧光染色和苯酚-氯仿提取法分析细胞DNA残留量,对脱细胞的效果进行评价,通过接触细胞毒性实验、材料浸提液细胞毒性实验及皮下埋植毒性实验,对制备的脱细胞血管支架进行生物相容性分析。用光交联的方法,以交联剂SANPAH为介导,CD34抗体修饰脱细胞血管支架。20只新西兰大白兔右下腹做一带蒂皮瓣,皮瓣供血动脉为股动脉的分支血管,血管移植部位选取同侧股动脉,切取一段,造成1cm长的全段缺损,实验组选用CD34抗体修饰脱细胞血管支架,对照组用未经交联的脱细胞血管支架,各10根,显微外科端端吻合替代缺损的兔股动脉。术后通过对皮瓣色泽质地的观察,了解皮瓣的血供情况,间接反映吻合血管的通畅性。术后行彩色多普勒,数字减影血管造影检查和病理切片观察移植血管的通畅情况及细胞粘附情况。结果 :苏木精-伊红染色及Masson三染色显示脱细胞血管支架无细胞成分残留,保持较完整的细胞外基质成分;电镜扫描皿管表面以胶原为主,适合细胞粘附;荧光染色脱细胞支架材料未见阳性核染色;电泳检测分析显示脱细胞血管支架DNA含量显著降低;力学检测证实脱细胞血管支架保持了正常血管的力学特征;接触细胞毒性实验与材料浸提液细胞毒性实验测定脱细胞支架与细胞有良好的粘附性,细胞毒性为0-1级;大鼠皮下埋植8周后基本未见炎性细胞,说明脱细胞血管支架在动物体内无排斥,与周围组织具有良好的相容性。实验组皮瓣术后血运较好,对照组皮瓣术后肿胀坏死。移植术后4周,行彩色多普勒和数字减影血管造影检查,实验组血管7例通畅,血管无明显狭窄,通畅率为70%,闭塞3例可见吻合口附壁血栓形成;对照组术后1周无1例通畅,均为血栓形成。实验组术后4周处死动物,解剖移植血管,病理切片行苏木精-伊红染色,显示实验组通畅的脱细胞血管支架表面形成连续融合单层细胞,管腔无明显狭窄,对照组术后1周脱细胞血管支架腔内血栓形成,腔内表面缺乏细胞覆盖。结论 :反复冻融、超高压及小剂量SDS处理能在较短时间内彻底脱除血管的细胞成分,对血管的力学性能影响小,用这种结合物理和化学的方法脱细胞处理的血管支架无细胞毒性,具有优良的生物相容性。用光交联的方法,以交联剂SANPAH为介导,可将CD34抗体牢固的交联在血管内腔壁上。经交联CD34抗体的脱细胞血管支架对比未经交联的脱细胞血管支架无论在早期抗凝及通畅率上均有优势。经过修饰的血管材料在体内募集循环中的内皮祖细胞参与再内皮化是完全有可能的,这种方法简化了组织工程血管体外构建的过程,为组织工程血管的研究又向前推进一步。