【摘 要】
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为确定一条采用亲和层析技术分离纯化酵母中磷酸激酶的较佳工艺路线,采用分步盐析初步纯化己糖激酶(HK),考察硫酸铵饱和度对盐析效果的影响;以ATP为配基,SESA活化纸纤维素制
【机 构】
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浙江工业大学,药学院,浙江,杭州,310014
【出 处】
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华东六省一市生物化学与分子生物学2005年交流会
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为确定一条采用亲和层析技术分离纯化酵母中磷酸激酶的较佳工艺路线,采用分步盐析初步纯化己糖激酶(HK),考察硫酸铵饱和度对盐析效果的影响;以ATP为配基,SESA活化纸纤维素制备亲和层析剂,确定最佳偶联条件和最佳静态吸附pH值后,将粗酶液直接上亲和层析柱,看分离纯化的效果;在载体和配基之间接上1,6-己二胺为间隔臂,比较接臂前后对吸附选择性的影响.粗酶液经分步盐析后纯化倍数达3.5倍;粗酶液直接上亲和层析柱,一步纯化后纯化倍数达3.7倍;并确定了接间隔臂可以提高载体对HK的选择性.实验证明:以ATP为配基的亲和层析法纯化酵母细胞中的磷酸激酶是可行的。
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