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目的:构建WboA基因编码缺失的粗糙型布氏杆菌并验证其免疫效果。
方法:光滑型布氏杆菌脂多糖(LPS)O-侧链合成必须的糖基转移酶,该基因的缺失或破坏会影响布氏杆菌光滑型表型的形成。本研究以猪源光滑型布氏杆菌S2株为研究对象,通过同源重组将氯霉紊抗性基因(Cmr)完全替代s2株的WboA基因,获得重组粗糙型布氏杆菌rS2-WhoA株。
结果:重组菌在适宜的培养基(TSA)上传50代后仍保持对氯霉素的抗性。用1×107 CFU rS2-WboA免疫BAILB/c小鼠和豚鼠,1个月后均能通过平板凝集试验检测到粗糙型抗体。1×1011 CFU rS2-WboA菌攻毒BALB/c小鼠后,不会引起死亡,并且能抵抗500 CFU强毒M28的攻击。
结论:重组菌rS2-WboA与原始株S2具有相似的保护性和更高的安全性,其保护性也略高于另一重组株rS2-WboC。