琼胶寡糖是重要海洋活性物质，通过水解琼脂糖得到.其中新琼四糖是一种研究较多的琼脂低聚糖，具有抗疲劳、调节肠道微生物、保湿、抗氨等生物活性.然而，迄今为止，很难制备得到纯度高、产量大的新琼四糖.一方面化学法难以产生具有特殊聚合度的琼胶寡糖，另一方面琼脂糖溶解度低限制了β-琼胶酶制备得到大量的琼胶寡糖.本研究建立了酸解和酶解相结合的大规模生产新琼四糖的方法.以高浓度(150g l-1)的琼脂糖为原料，经酸水解成低聚糖，中和，用β-琼脂酶AgWH50B 将低聚糖降解为以新琼四糖为主的粗寡糖溶液.然后，用乙醇沉淀法除去聚合度较高的寡糖.最后，用生物凝胶P2 柱纯化新琼脂四糖.在最佳条件下，由150g 琼脂糖可制得34.2g 的新琼脂四糖酶，纯度为91.2％，为迄今为止的最高含量.结果表明，采用化学与生物相结合的方法，可以有效地生产一些新型生物活性化合物.在这项研究中建立的方法为其他低聚糖的制备提供了思路.