粉红螺旋聚孢霉（Clonostachys rosea,异名:粉红粘帚霉,Gliocladium roseum）是一类重要的菌寄生菌,可以寄生核盘菌、镰刀菌、丝核菌等多种植物病原真菌,具有良好的应用前景。为研究粉红螺旋聚孢霉67-1功能基因,本研究团队前期通过高通量测序获得了67-1全基因组信息,从中获得了一个编码聚酮合酶的基因crps。利用67-1全基因组信息设计crps全长引物,并通过PCR扩增获得基因全长。该基因全长为7 584bp,不含内含子。生物信息学分析表明,crps可以编码一个由2 527个氨基酸组成的蛋白质,分子量为277ku,等电点为5.77,亲水性蛋白,无信号肽和跨膜区。为进一步研究crps在粉红螺旋聚孢霉中的功能,本研究采用基因敲除的方法进行功能鉴定。首先构建crps基因敲除载体,在hph两侧同时插入了crps的上游和下游同源臂。然后利用PEG-CaCl₂转化方法,将crps敲除载体转入67-1原生质体中,通过潮霉素抗性标记筛选,PCR扩增和测序验证,最终获得1株能够稳定遗传的突变株。为研究crps在粉红螺旋聚孢霉中的具体功能,本实验分别对野生菌株67-1和crps敲除突变株进行了形态学、对核盘菌菌核寄生能力、对多种病原菌的拮抗能力和田间防治菌核病能力进行了测定。结果表明,crps的敲除不会影响粉红螺旋聚孢霉的菌落形态、对核盘菌的寄生能力、对病原菌的拮抗能力和田间防治大豆菌核病的能力,但会显著提高其厚垣孢子产量。研究结果表明聚酮合酶是粉红螺旋聚孢霉厚垣孢子产生过程中的重要因子,同时也为揭示粉红螺旋聚孢霉厚垣孢子形成分子机制奠定了理论基础。