【摘 要】
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机体内存在一些先天免疫因子,具有抑制病毒复制和防止病毒跨种间传播的作用,这些因子被称为"宿主限制因子".在对人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)等的研究中发现,细胞内至少有四种
【机 构】
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黑龙江省哈尔滨市马端街427号,150000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物室
【出 处】
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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议
论文部分内容阅读
机体内存在一些先天免疫因子,具有抑制病毒复制和防止病毒跨种间传播的作用,这些因子被称为"宿主限制因子".在对人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)等的研究中发现,细胞内至少有四种不同蛋白(APOBEC3G、Trim5α、Tetherin和SAMHD1)可干扰病毒生命周期的不同阶段,有效地限制逆转录病毒感染,从而形成宿主抵抗病毒的天然屏障.这种病毒-宿主之间的相互作用存在种间特异性,人Tetherin是一种受干扰素调节的膜蛋白,可以限制逆转录病毒释放,而病毒在长期适应宿主过程中通过编码的蛋白克服了这种限制.如HIV-1编码的vpu可对抗人的tetherin的限制,而猴艾滋病病毒SIV却不能克服这种限制.目前,有关马先天性免疫限制因子以及这些因子与同为逆转录病毒慢病毒属的EIAV相互作用的研究还是一项空白.
本研究克隆马tetherin基因,研究其免疫学活性,揭示其抗逆转录病毒感染的功能。从马血浆中提取总RNA,通过RT-PCR扩增tetherin基因,克隆到带有HA标签的pcDNA3.l(+)真核表达载体上,在293T细胞或驴胎皮肤细胞上表达,顺时共转染EfAV感染性克隆和不同种属的Tetherin或直接感染EIAV等慢病毒,采用Western Blotting和间接免疫荧光试验检测Tetherin的表达以及病毒的释放。结果显示,马Tetherin在体外培养细胞中可以得到良好表达,讨量表达Tetherin可以呈计量依赖性地限制EIAV,HIV,SIV等逆转录病毒的释放,并将逆转录病毒限制在细胞膜的表面。E1AV的Env蛋白可以中和马Tetherin的限制作用。马Tetherin基因的克隆及其抗病毒活性的研究为进一步探索马Tetherin的免疫学活性、揭示马Tetherin与逆转录病毒相互作用的机制奠定了基础,为发现其他马属动物宿主细胞限制因子和抗病毒的相关研究提供了依据。
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