【摘 要】
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东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因，以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针，筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选，特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定，获得了19条EST序列。其中13个条EST序列与已知基因或表达序列标签同源，6个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性，为新的表达序列标签。将19个EST序列的阳性
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海 200232;上海师范大学生命与环境科学学院,上海 200234
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会
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东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因，以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针，筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选，特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。
随机挑取92个克隆进行序列测定，获得了19条EST序列。其中13个条EST序列与已知基因或表达序列标签同源，6个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性，为新的表达序列标签。将19个EST序列的阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养，其中4号(Genebank登陆号：EW968294)、13号(Genbank登陆号：EW968303)、14号(Genebank登陆号：EW968304)、15号(Genebank登陆号：EW968305)、18号(Genbank登陆号：EW968308)克隆均诱导了显著的杀虫效果。综合生物信息学分析结果及体外杀伤试验结果，编码CASP8和FADD类似性细胞程序性死亡调节蛋白、α-2-HS-糖蛋白、M4蛋白、具有R3H结构域的一种mRNA结合蛋白以及三种未知蛋白的编码基因(14、15、18号克隆)可能是东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因。本研究为进一步研究东方田鼠抗血吸虫机理奠定了基础。
其他文献
目的：以比格犬为实验动物经口感染原头蚴，观察细粒棘球绦虫成虫的感染情况。同时按不同剂量原头蚴感染犬，了解该犬较为适宜的原头蚴感染计量。方法：分别以5万、15万、25万枚原头蚴感染6只比格犬，感染后40天开始检查粪便有无虫卵排出。结果：人工感染原头蚴后48天虫体开始排卵；6只比格犬(Beagle)细粒棘球绦虫人工感染率为100％，其中5万枚感染的平均荷虫3457条。成熟2074条，未成熟1383条；
目的：细粒棘球绦虫原头蚴可以在体外向成虫和囊蚴两个方向发育，为研究细胞及虫体的分化提供一个较好的体外实验模型；本文通过原头蚴在两种细胞培养液中(RPMI-1640和MEM)培养以观察其存活、生长及发育情况，从而为研究寄生虫发育提供最基本的数据资料。方法：细粒棘球绦虫幼虫-原头蚴培养在细胞培养基(RPMI-1640和MEM)中分4组，即I组纯RPMI-1640培养液；Ⅱ组：含10％的小牛血清的164
根据GenBank公布的隐孢子虫SSU rRNA基因序列设计一对引物，并以标准基因组DNA为模板，初步建立检测奶牛隐孢子虫的基于SYBR Green的Real-Time PCR方法，对奶牛微小隐孢子虫(c．parvum)和安氏隐孢子虫(C．andersoni)阳性样品和40份奶牛粪便进行检测。结果显示，此次建立的Real-Time PCR对C．parvum和C．andersoni均能扩增出曲线，且
为克隆和表达编码微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)卵囊壁蛋白CP41基因．以本室繁殖保存的微小隐孢子虫鼠基因型卵囊提取总RNA作为模板，RT-PCR扩增CP41基因，克隆到pMD 18-T并进行序列测定，与GenBank下载的序列进行同源性比对。将鉴定正确的序列亚克隆到pGEX-5x-3原核表达载体，构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41，转化BL21(DE3)感受态细
提取微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)鼠基因型卵囊总RNA，RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD 18-T载体中，进行测序和同源性比对。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+)，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达，表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果显不，克隆的目的基因核苷酸
利用生物信息学技术预测了柔嫩艾美尔球虫Ⅱ型丙二酰单酰辅酶A：ACP转移酶基因序列，分别设计引物扩增完整ORF，去除信号肽而保留转导肽以及去除信号肽和转导肽的功能区域序列片段；选取pMAL-c2x、pET-32a(+)和pProExHTa3种不同的表达载体，分别构建重组表达质粒，转化到宿主大肠杆菌Rosseta(DE3)，在不同条件下诱导表达，利用酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶连系统测定表达产物活性。表
目的:观察弓形虫感染对大鼠学习记忆能力和海马组织细胞因子(白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6)水平的影响，探讨其可能机制。方法:40只清洁级SD大鼠随机分成4组，即对照组和3组不同剂量的弓形虫感染组(2×103、2×105、2×107)。9周后进行被动回避实验和morris水迷宫试验，观察弓形虫感染对大鼠的学习记忆能力等行为学变化。同时应用放射免疫分析方法检测大鼠海马组织IL-1β、IL
以大肠杆菌O157rFBE和sir2为待检靶基因，设计两对引物和两条MGB探针，rfbE和six2探针5’端分别用FAM和VIC基团标记，3’端均用Taqman-MGB标记。建立并优化了检测大肠杆菌O157的二重荧光定量PCR方法，可检测的最低DNA浓度是101拷贝/uL；试验中O157菌株检测结果均为rfbE阳性，而非O157菌株检测结果均为阴性；重复性实验中，批间差异小于80％，批内差异小于7
【目的】揭示从我国部分地区仔猪腹泻或水肿病病猪体内分离到的300个大肠杆菌分离株所属病原性大肠杆菌的病原型(pathotype)、毒力基因及其与O血清型的关系。【方法】O血清型采用常规的凝集试验进行测定，毒力基因采用PCR方法检测。【结果】通过对这300个分离株的O血清型及其毒素、紧密素和黏附素基因进行鉴定，结果显示除50株未定型、17株自凝外，测定出233个分离株的血清型，这些分离株覆盖了45个
弓形虫病是一种呈世界性分布，且严重危害人类健康与畜牧业的人兽共患性寄生虫病，本文介绍了于1990年代开始即试用弓形虫速殖子膜抗原，以间接酶联免疫吸附试验检测猪血清弓形虫特异性IgG抗体，取得了较满意的结果。