【摘 要】
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本文根据GenBank上登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒序列,设计一对引物用于扩增和截短表达M蛋白.经过PCR、酶切及测序鉴定,成功地构建了PRRSV M蛋白原核表达载体.重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析可检测到分子量大小约为27.3 ku的目的蛋白带,通过PRRSV猪阳性血清的Western-blotting检测,出现特异性的反应条带,结果表明表达的蛋白具有良好的特异性,这为该蛋白的应
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 猪传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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本文根据GenBank上登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒序列,设计一对引物用于扩增和截短表达M蛋白.经过PCR、酶切及测序鉴定,成功地构建了PRRSV M蛋白原核表达载体.重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析可检测到分子量大小约为27.3 ku的目的蛋白带,通过PRRSV猪阳性血清的Western-blotting检测,出现特异性的反应条带,结果表明表达的蛋白具有良好的特异性,这为该蛋白的应用研究,特别是在临床诊断上的应用奠定了基础.
其他文献
2006年夏季以来发生的猪高热病,影响了湖南省数十个县市,造成了重大经济损失。总结防控猪高热病的一些经验教训有很多,其中“病性不清,防治茫然”是一个重要方面。为便于诊断分析,首先从该病基本情况的回顾开始。本文介绍了流行病学特点,阐述了猪高热病的临床症状,分析了解剖变化,探讨了检验与诊断的方法。
生猪“高热性病”,自2005年7月份开始,近三年来,每到7月中旬就在我们地区暴发,该病传染速度快,播及面广,给农民养猪带来了很大的损失,特是今年,由于气温偏高,病情复杂,本地区发病率高达90%以上,死亡率在20-80%。为了加强猪高热性病的防治,加强广大农民对生猪高热病的认识,本文就该病的发生情况和防治方法进行了总结,浅谈了治疗体会。
应用建立的两个多重PCR方法,对2005-2006年收集于江苏地区的211份猪高热病疑似病料进行检测,结果PRRSV阳性率为51.2%;PCV阳性率为44.1%:CSFV阳性率为10.4%;PPV阳性率为3.9%:PRV阳性率为2.4%.同时发现,2005年病料中PCV2的阳性率为21.2%,2006年为73.2%;2005年PRRSV的阳性率为38.1%,2006年为67.7%.2006年猪高热
从2006年9月-2008年5月河南省发生猪高热综合征的113家规模化猪场222头病死猪的153份肺、54份关节液、66份心血、5份脑,8份脾脏、4份淋巴结和1份脓汁共291份病料中分离致病性细菌.通过培养特性试验、生化试验、PCR、毒力试验、血清学试验鉴定了246株主要的致病细菌,其中大肠杆菌75株,链球菌125株,沙门氏菌6株,巴氏杆菌16株.波氏杆菌14株,副猪嗜血杆菌10株.对其中的沙门氏
高致病性猪蓝耳病去年以来在全国22个省、市、自治区流行蔓延,重庆市也不例外,流行高达35个区县,占全市的87.5%。这次大流行给养殖户造成重大经济损失,给养猪业带来严重灾难。本文介绍了猪白细胞干扰素在永川区关勇猪场和军医大学动物实验场的治疗过程和效果。
通过考察中草药提取物对猪生殖和呼吸系统综合征病毒在传代细胞MARC-145细胞中增殖的影响,证明中草药提取物具有抑制病毒增殖作用.结果表明,中草药提取物能够显著抑制PRRSV体外增殖,时PRRSV的最小直接杀灭浓度为5%.
将PRRSV修饰的ORF5(MORF5)与ORF6基因分别克隆入笔者构建的改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified vaccinia virus ankara,MVA)转移载体pLR-gpt的两个多克隆位点中,构建重组转移载体pLR-MORF5/ORF6.经脂质体介导,将构建好的重组转移载体转染感染亲本MVA 2h的BHK-21细胞单层,用药物选择性培养基(MXHAT)在24孔板上进行连续筛选纯化
蓝耳病的控制成为世界性难题,免疫预防成为人们关注的焦点.本文就中国猪场过去几年应用活疫苗情况,总结分析了Ingelvac(R)PRRS MLV对中国蓝耳病感染猪场的控制效果,为我国猪场使用活疫苗防控蓝耳病提供参考.湖北某猪场,2005年以来,每个月10窝猪整窝流产,母猪发病率达30%,通过免疫接种蓝耳病弱毒苗Ingelvac(R)PRRS MLV:首次普免后,间隔4周种猪再普免一次,3个月内,使得
本研究通过RT-PCR方法扩增获得了美洲型PRRSV N基因,分别构建了克隆载体pMD19-T-N和毕赤酵母表达载体pPIC9K-N,并进行了PCR和双酶切鉴定.PCR和双酶切鉴定结果均得到预期大小的片段,结果表明成功建立相应载体.将pPIC9K-N经Sac Ⅰ线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115获得阳性重组菌,重组子经G-418筛选后表型鉴定为Mut+,且PCR鉴定为阳性.阳性重组子经甲醇诱导
将PRRSV长春分离株的GP5和M基因插入到鸡痘病毒转移载体pUTAL复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移载体pUTAL-GP5-M.将该重组质枉与鸡痘病毒(FPV)282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组.通过3次BrdU加压筛选,经RT-PCR和间接免疫荧光方法鉴定重组病毒,表明目的基因在重组鸡痘病毒中得到表达.最终成功构建1株重组鸡痘病毒,并可正确表达PRRSV GP5和M