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目的 构建基于miR-30结构的shmirRNA真核表达载体,在膀胱癌T24、ScaBER细胞株中沉默VEGF-C基因的表达,探索全新的VEGF-C抑制方法.方法 根据前期筛选出的有效抑制VEGF-C表达的RNA干扰序列设计shmirRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入CRM-30载体,转化扩增后进行酶切、测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人膀胱移行细胞癌株T24、人膀胱鳞癌细胞株ScaBER,并利用G418加压筛选进行稳定转染,建立VEGF-C基因沉默的亚系.每种细胞分别设PBS对照组、通用阴性对照质粒(CRM-30-non)组及重组质粒治疗(CRM-30-shmirVEGF-C)组.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测各种细胞中VEGF-C基因表达水平,通过流式细胞仪分析转染重组干扰质粒前后T24及ScaBER细胞凋亡及细胞周期的变化.结果 所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配,载体构建成功；重组质粒稳定转染T24、ScaBER细胞后,VEGF-C mRNA表达分别下调(74.63±9.55)％和(57.26±3.46)％,VEGF-C蛋白表达分别下调(84.11±2.1 0)％,(P＜0.01),76.21％±2.24％ (P＜O.01),分选出亚系T24、ScaBER经反复传代仍可保持VEGF-C基因沉默的表型.与对照组相比重组质粒组细胞周期明显受到阻滞,T24及ScaBER细胞中S期的细胞明显减少.转染干扰质粒后的ScaBER细胞中S期细胞下降了(18.07±2.26)％,而转染干扰质粒后的T24细胞中S期细胞下降了(19.65±3.78)％.结论 成功构建了靶向人VEGF-C的基于miR-30结构的shmirRNA,沉默膀胱癌细胞VEGF-C的表达,为探索更加高效安全的VEGF-C抑制剂奠定基础,也为膀胱癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新手段.