【摘 要】
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目的：应用基因芯片技术比较马尔尼菲青霉25℃菌丝相和37℃酵母相基因表达之间的差异及同一温度下不同培养时间点基因动态表达的差异,同时应用实时荧光定量PCR方法验证基因
【机 构】
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四川大学华西医院皮肤科,四川成都,610041;四川省医学科学院,四川省人民医院皮肤病性病研究所,四川成都,610041四川大学华西医院皮肤科,四川成都,610041四川大学国家生物治疗重点实验室,四
【出 处】
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中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会
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目的：应用基因芯片技术比较马尔尼菲青霉25℃菌丝相和37℃酵母相基因表达之间的差异及同一温度下不同培养时间点基因动态表达的差异,同时应用实时荧光定量PCR方法验证基因表达谱芯片分析结果,以期在转录组水平上对马尔尼菲青霉的分子生物学机制有一个总体认识.方法：将马尔尼菲青霉25℃和37℃摇床内分别振荡培养(150r/min) 6h、 12h、24h、48h后抽提RNA.用Agilent基因表达谱芯片进行差异分析,筛选出上调与下调基因,进行功能聚类分析,初探在不同温度条件下即马尔尼菲青霉菌丝相和酵母相基因表达的差异.在马尔尼菲青霉25℃菌丝相和37℃酵母相的芯片分析差异基因中选择9个与代谢有关的基因,用实时荧光定量PCR检测其在马尔尼菲青霉25℃菌丝相和37℃酵母相培养48h的表达量差异,与芯片分析结果进行比较.结果：共筛选差异表达基因1884个,涉及信号转导、代谢、免疫反应、细胞粘附、凋亡等生物学过程.其中参与MAPK通路、脂肪酸代谢通路、乙醛酸代谢通路及编码热休克蛋白家族的基因在两相之间差异变化尤其显著.实时荧光定量PCR对Faa1、Fba1、Pdb1、Pck1、Aid5、Aid3、Cdc19、Adh5、Aes2共9个基因进行检测,37℃酵母相表达量与25℃菌丝相表达量比较的Fold change值与基因芯片检测结果具有相同的方向性,且数据接近.结论：马尔尼菲青霉25℃菌丝相和37℃酵母相之间的基因表达存在明显的差异,涉及多个不同的生物学通路和多组酶学.基因芯片筛选基因表达谱具有高通量大规模的特点,而实时荧光定量PCR则适合单个基因表达变化的研究,两者互为补充和印证.
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