【摘 要】
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目的:开发一种稳定性良好的体积排阻色谱方法,用于单克隆抗体单体与聚合体的分析分离.并研究流动相组成(pH和离子强度)、流速以及色谱柱长度等参数对SEC分离的影响.
方法
【机 构】
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沃特世公司美国马萨诸塞州米尔福德市枫树街34号沃特世科技(上海)有限公司,上海201206
【出 处】
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2015年生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会
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目的:开发一种稳定性良好的体积排阻色谱方法,用于单克隆抗体单体与聚合体的分析分离.并研究流动相组成(pH和离子强度)、流速以及色谱柱长度等参数对SEC分离的影响.
方法:对一组蛋白标准品混合物,基于峰形、分离度、校准准确度以及定量结果对SEC方法进行评估.通过调整该方法所涉及的多个参数来改善分离效果和提高方法稳定性(对分离效果的评估基于色谱柱校准、分离度以及聚集体定量等多个标准).
结果:在单抗及其聚集体应用中,1)当氯化钠浓度从50升至200 mM时,较大的离子强度可减少mAb单体的峰拖尾现象并使峰形更窄;而当流动相离子强度从200升至250 mM氯化钠时,上述变化不再明显.2)缓冲液pH会影响次级相互作用.pH变化时单体的洗脱曲线发生了改变,而二聚体的洗脱曲线则没有变化,说明发生变化的是流体动力学半径而非次级相互作用.3)采用低流速时运行时间会更长,但可提高分离度,从而获得更可靠的聚集体定量结果.4)通过增加色谱柱长度可改善SEC分离度.
结论:任何SEC方法都必须进行充分评估以开发出最佳方法.与耗时的HP-SEC相比,使用UP-SEC能够在更短的时间内更加高效和可靠地预测方法优化结果.Auto·Blend Plus技术的使用也有助于更加轻松地系统性研究流动相对蛋白质结构以及次级相互作用的影响.
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