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目的:药物进入体循环后因结构上的差异会与血液中的成分结合(如血细胞、血浆蛋白等),形成结合型(bound)药物,通过血流分布到全身各处,最终到达靶部位与相应的受体结合发挥药理学效应。药物与血浆蛋白结合后,不能跨膜转运而"储存"于血液中,只有游离(free)或未与血浆蛋白结合的药物(unbound)才能代谢和排泄。药物与血浆蛋白结合是影响药物分布的重要因素,影响游离药物浓度进而影响药理效应。血浆中游离药物的浓度检测虽然对于药物的药理效应和毒性能够提供全面的阐述,但是真正发挥药理效应的是靶部位的药物浓度,然而直接准确的测定靶部位的药物浓度,对检测方法及实施都是巨大的挑战。本研究拟建立超滤联合UPLC-MS/MS方法定量测定人血浆中游离多西他赛的浓度,用于多西他赛脂质微球注射液临床药代动力学研究。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18超高效液相色谱柱(50 mm×2.1 mm i.d.,粒径1.7μm),以含有0.2%甲酸的乙腈和含0.2%甲酸、10 mM乙酸铵的水(pH 3.16)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL/min,柱温为35℃,进样温度为4℃,分析时间为2.5 min,进样体积为5μL。采用电喷雾离子源正离子检测,质谱参数中GS 2为50 psi。采用密理博公司的AmiconOR超滤管(0.5 mL)并不断优化超滤条件。血浆样品经超滤后去除蛋白结合药物,获得的游离药物经过液液萃取法对血浆样品预处理后进入UPLC-MS/MS系统进行色谱分析和浓度测定。结果:超滤联合UPLC-MS/MS方法的标准曲线定量范围为0.5~200 ng/mL(r2>0.99),LLOQ为0.5 ng/mL,日内和日间的精密度准确度符合定量检测的要求。内标校正的低中高质控样品的提取回收率分别为(98.1±5.9)%、(104.1±5.7)%和(104.8±14.2)%,内标和多西他赛的基质效应在85.9%至99.0%范围内,内标校正的基质效应分别为(93.4±14.9)%、(98.4±7.9)%和(97.0±10.6)%。不存在残留效应,游离多西他赛在不同的储存条件下稳定。超滤所需血浆体积仅为0.45 mL,该方法已成功用于测定静脉滴注60 mg/m~2的多西他赛脂质微球注射液后血中游离多西他赛。结论:首次建立了定量测定人血浆中游离多西他赛浓度的超滤联合UPLC-MS/MS方法,该方法快速、灵敏、准确、可重现,为进一步阐述游离药物浓度与药物疗效或毒性之间的关系奠定基础。