应用RNAi方法沉默猪内源性反转录病毒及效果评价

来源 :2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cododo2009
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  目的:尝试RNAi(RNA interference)方法沉默猪源细胞系PK-15细胞中的PERV(Porcineendogenous retrovirus),并通过反转录酶活性及pol基因QPCR检测评价沉默效果。方法:依据GcnBank公布的PERV病毒pol基因序列,采用Ivitrogen公司的BLOCK—iTTMRNAiDesigller软件设计Stealth siRNA序列。合成的siRNA转染PK-15细胞,转染72h后检测细胞上清PERV病毒反转录酶活性及细胞内PERV病毒pol基因拷贝数并评价沉默效果。结果:反转录酶活性及pol基因拷贝数检测结果表明,设计的3条Steal也siRNA序列中位于pol基因3272-3296bp的序列能有效沉默PERV病毒。结论:RNAi方法可有效使猪源PK-15细胞中的PERV病毒沉默,为进一步研究天然抗病毒分子(如APOBEC3F)与PERV的相互作用提供了实验基础,同时也为猪源移种移植研究PERv生物安全性提供了一种可供尝试的方法。
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