【摘 要】
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本试验首先用PCR方法扩增出传染性法氏囊(IBDV)株VP2基因,将其克隆到T载体上,并进行了序列的分析.然后将其亚克隆到真核表达载体pcDNA4/His/LacZ中,并将该真核表达载体上的CMV启动子和增强子控制的含LacZ和VP2基因表达盒克隆入pUS2基因中,成功的构建了马立克氏病毒的转移载体.然后,通过脂质体方法转染已感染马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,用96孔板稀释法纯化表达
【机 构】
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北京市农林科学院畜牧兽医研究所(北京);中国农业大学动物医学院 北京市农林科学院畜牧兽医研究所(北
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会
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本试验首先用PCR方法扩增出传染性法氏囊(IBDV)株VP2基因,将其克隆到T载体上,并进行了序列的分析.然后将其亚克隆到真核表达载体pcDNA4/His/LacZ中,并将该真核表达载体上的CMV启动子和增强子控制的含LacZ和VP2基因表达盒克隆入pUS2基因中,成功的构建了马立克氏病毒的转移载体.然后,通过脂质体方法转染已感染马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,用96孔板稀释法纯化表达LacZ基因的重组CVI988病毒株,获得蓝色的重组病毒.该重组病毒通过PCR方法鉴定证实其基因组中含有完整的传染性法氏囊VP2基因.Western-blot实验证实重组病毒表达了传染性法氏囊VP2蛋白.
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采用鸡胚接种和细胞培养的方法从广西武鸣某鹅场患病鹅脑、肝、脾中分离到两株病毒,经RT-PCR、HA、HI试验等研究,该分离毒为鹅副粘病毒.该毒株对鸡胚半数致死量(ELD)为10/0.1ml,对鸡胚成纤维细胞的半数感染量(TCID)为10/0.1ml.根据鸡新城疫病毒毒力测定的标准,测定分离株最小致死量的鸡胚平均死亡时间(MDT)为38.8h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为2,将分离毒10
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