【摘 要】
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目的:利用TALEN技术建立RYBP基因敲除的Hela细胞株,为研究RYBP在宫颈癌中的分子功能做准备.方法:首先利用TALEN序列设计软件,分别设计靶向RYBP第二个编码外显子的左臂和右臂
【机 构】
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医学分子生物学国家重点实验室,中国医学科学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系,北京,中国
【出 处】
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第四届吴宪吴瑞国际学术研讨会、第九届全国医学生物化学与分子生物学、第六届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术讨论会
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目的:利用TALEN技术建立RYBP基因敲除的Hela细胞株,为研究RYBP在宫颈癌中的分子功能做准备.方法:首先利用TALEN序列设计软件,分别设计靶向RYBP第二个编码外显子的左臂和右臂识别序列,再利用上海斯丹赛公司的TALEN质粒快速构建试剂盒构建左右臂载体,经酶切鉴定和测序确认插入片段正确的克隆.将左右臂质粒共转染Hela细胞,PCR产物测序鉴定敲除活性,通过有限稀释法分离单细胞克隆.用Western blot和PCR克隆测序鉴定RYBP基因纯合敲除的细胞株.结果:成功构建针对人RYBP基因第二外显子的TALEN左右臂质粒,经检测该设计位点对RYBP基因的敲除活性＞50％;得到RYBP纯合敲除的Hela细胞株5株.结论:利用TALEN技术在Hela细胞中成功敲除RYBP基因,为在Hela细胞中研究RYBP的功能奠定基础.
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