论文部分内容阅读
目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TrichostatinA,TSA)联合Hedgehog (Hh)信号通路阻断剂环巴胺(Cyclopamine,CYA)干预对胰腺癌PANC-1细胞株凋亡、侵袭力的影响并初步探讨其可能机制.方法：采用CCK8(Cell Counting Kit-8)方法检测PANC-1细胞株在TSA、CYA作用24h的50％抑制浓度(IC50).TSA、CYA单独及联合处理PANC-1细胞24h后,Hochest 33258荧光染色观察其凋亡；荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测Hh信号通路关键分子及凋亡相关基因mRNA表达的变化；蛋白质印迹法(Wester blot,WB)检测Bcl-2、activated caspase-3/8/9、Gli1、Smo、Ptc-1蛋白表达的变化；细胞免疫荧光标记法(Immunofluorescence,IF)检测Gli1蛋白表达的变化.Transwel1小室检测低浓度药物对侵袭力、迁移能力的影响.结果：Hochest 33258染色显示TSA及CYA均可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,IC50分别为0.51±0.07μM和33.6±2.3μM (24h),两者联合指数为0.835,具有低度协同作用.干预后Bcl-2 mRNA表达下降,Bax mRNA表达上调,尤以联合组明显.虽然0.5μM TSA干预才可抑制Gli1 mRNA的表达,但低浓度TSA联合CYA,进一步抑制Hh通路,降低Gli1、Smo mRNA表达.WB结果显示TSA、CYA单独及联合处理PANC-1后,凋亡相关蛋白caspase-3/8/9活化程度进一步上升,凋亡抑制因子Bcl-2的表达明显下降,Hh信号关键分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表达均明显下降,联合组最为明显.同时,细胞免疫荧光结果也显示Gli1表达明显下降.低浓度TSA和CYA处理未导致PANC-1细胞MMPs/TIMPs mRNA明显改变.Transwell结果表明低浓度TSA、CYA对胰腺癌PANC-1细胞侵袭迁移力未见明显作用.结论：TSA、CYA可协同抑制Hh通路,诱导胰腺癌PANC-1细胞的凋亡,但未见胰腺癌PANC-1细胞侵袭能力有明显改变.