【摘 要】
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研究目的:探究自噬相关蛋白Atg5对羊种布鲁氏菌16M感染小鼠巨噬细胞RAW264.7引起的非典型自噬及16M胞内生存繁殖能力的影响。材料与方法:通过分子生物学手段构建了p LEX-MCS-
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研究目的:探究自噬相关蛋白Atg5对羊种布鲁氏菌16M感染小鼠巨噬细胞RAW264.7引起的非典型自噬及16M胞内生存繁殖能力的影响。材料与方法:通过分子生物学手段构建了p LEX-MCS-Atg5慢病毒表达载体,并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,QRT-PCR和Western blot分别检测Atg5的表达量;布鲁氏菌侵染过表达Atg5的RAW264.7,激光共聚焦技术检测细胞内自噬体与溶酶体融合的情况;CFU检测布鲁氏菌在过表达Atg5的RAW264.7中的生存复制情况。结果:DNA测序及慢病毒包装实验表明Atg5重组慢病毒构建成功;QRT-PCR和Western blot结果表明Atg5的表达明显高于对照组(P<0.05)。激光共聚焦实验显示,布鲁氏菌感染过表达Atg5的RAW264.7后,细胞内自噬体与溶酶体的融合情况明显高于对照组(P<0.05)。细菌CFU实验显示,与对照组相比,布鲁氏菌16M感染过表达Atg5的巨噬细胞后,胞内细菌数明显降低(P<0.05)。小结与讨论:过表达Atg5可促进布鲁氏菌诱导的非典型自噬中自噬体与溶酶体的融合,降低布鲁氏菌的胞内繁殖力。
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