一背景维生素A对人体多种器官的发育以及人体正常生理机能的维护有不可或缺的作用,然而过量摄入维生素A会引发毒副作用；维生素E作为一种抗氧化剂在体内的主要功能是保护细胞的生物膜结构,最近发现维生素E也能调控基因表达,维生素E缺乏症虽少见,却与新生儿发育不良和遗传代谢病相关.因此,准确测定人体内维生素A与维生素E具有重要意义.维生素A与维生素E由于化学性质活泼,易被氧化,对这类物质的准确定量具有很大的挑战.本应用案例介绍一种固相支持液液萃取技术(SLE)进行血样样品前处理,液相色谱-串联质谱进行样品测试的方法,方法采用Cleanert SLE 96孔板净化血浆样品,从血浆样品中萃取富集维生素A(视黄醇,VA)、α-生育酚(α-VE)和γ-生育酚(γ-VE),实验方法具有良好的稳定性及可靠性,可为VA、VE临床研究提供一种解决方案.二研究方法由于VA与VE稳定性差,为防止被氧化,在实验中需要加入抗氧化剂BHT；取100μL血浆至洁净样品瓶中,加入内标溶液,再加入50μL异丙醇和50μL水溶液,振荡混匀；将预混合好的溶液全部上样,静置5 min,使用含抗氧化剂的异辛烷/异丙醇(9/1)洗脱目标物,每次加入500μL,共洗脱4次,每次间隔5min,最后一步洗脱结束,将Cleanert SLE与收集板整体放到Cleanert M96生物样品前处理仪上,开启压力至0.02 MPa,约30 s,完全收集洗脱液；将洗脱液在室温下用Cleanert V96样品氮吹浓缩仪进行温和氮吹干,再使用500μL 0.1％甲酸甲醇(含1 g/L BHT)复溶,将样品进行LC-MS/MS分析,使用壳层色谱柱Bonshell C18进行目标物分离.三实验结果本实验中,目标物具有良好的线性关系,VA线性范围为0.05～5μg/mL(r2=0.9963),α-VE线性范围为1～25μg/mL(r2=0.9914),γ-VE线性范围为0.2～8μg/mL(r2=0.9979),目标物定量限分别为0.012μg/mL(VA)、0.022μg/mL(α-VE)、0.034μg/mL(γ-VE)；参考目标物在人体内含量范围,实验进行低、中、高浓度加标试验,平行处理6个样本,VA回收率范围为86.6％～111.4％(RSD范围1.7％～7.4％),α-VE回收率范围为85.4％～113.0％(RSD范围4.9％～9.6％),γ-VE回收率范围为96.2％～114.8％(RSD范围3.5％～6.8％).实验中还发现,由于SLE填料独特的性质,血样中会引起LC-MS/MS基质效应的磷脂、蛋白等内源性干扰物均被填料牢牢吸附住,不会干扰目标物检测,也保护了HPLC柱及LC-MS/MS仪器.四结论本应用呈现了一种简单、高效的样品前处理方法,通过Cleanert SLE 96孔板可高通量净化血样并萃取富集脂溶性维生素A与维生素E,本实验方法易操作且稳定,可在临床研究及药物代谢领域替代耗时、低效的液液萃取技术.