【摘 要】
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目的 观察苯代谢物对K562细胞转铁蛋白受体表达的影响以及DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)的干预作用.方法 K562细胞用苯代谢物处理72 h,处理期间的后48 h加入DNA甲基化抑制剂5-aza-CdR进行干预,然后利用荧光标记抗体与流式细胞技术分析细胞表面转铁蛋白受体的表达,应用反转录PCR技术分析细胞转铁蛋白受体mRNA的表达水平.结果 K562细胞经三种苯代谢
【机 构】
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北京航空航天大学生物与医学工程学院,北京100191
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目的 观察苯代谢物对K562细胞转铁蛋白受体表达的影响以及DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)的干预作用.方法 K562细胞用苯代谢物处理72 h,处理期间的后48 h加入DNA甲基化抑制剂5-aza-CdR进行干预,然后利用荧光标记抗体与流式细胞技术分析细胞表面转铁蛋白受体的表达,应用反转录PCR技术分析细胞转铁蛋白受体mRNA的表达水平.结果 K562细胞经三种苯代谢物苯酚(200,400和800 μmol· L-1)、氢醌(10,20和40 μmol·L-1)或1,2,4-苯三醇(5,10和20 μmol·L-1)处理24,48和72 h,三种苯代谢物均能浓度和时间依赖性抑制转铁蛋白受体在细胞表面的表达,其中最高浓度的苯酚组(800 μmol·L-1)处理72 h抑制率达59.5％,最高浓度的氢醌组(40 μmol·L-1)处理72 h抑制率达71.6％,而最高浓度的1,2,4-苯三醇组(20 μmol· L-1)处理72 h抑制率达46.3％；且三种苯代谢物处理72 h均能浓度依赖性抑制转铁蛋白受体mRNA在K562细胞内的表达.进一步观察DNA甲基化抑制剂5-aza-CdR对苯代谢物抑制转铁蛋白受体在K562细胞表面表达的干预作用.结果显示,5-aza-CdR单独处理并不改变转铁蛋白受体在K562细胞表面的表达；而当苯代谢物处理24 h后,再加入5-aza-CdR共同处理K562细胞48 h,转铁蛋白受体在细胞表面的表达得到明显恢复,其中苯酚(800 μmol·L-1)处理细胞在存在5-aza-CdR情况下从41.4％恢复到83.4％,氢醌(40 μmol·L-1)处理细胞在存在5-aza-CdR情况下从31.7％恢复到82.4％,1,2,4-苯三醇(20 μmol·L-1)处理细胞在存在5-aza-CdR情况下从51.7％恢复到87.7％.观察5-aza-CdR对苯代谢物抑制K562细胞转铁蛋白受体mRNA表达的干预作用发现,5-aza-CdR单独处理并不改变K562细胞转铁蛋白受体mRNA表达水平；而当苯代谢物处理K562细胞24 h后,再加入5-aza-CdR共同处理48 h,细胞转铁蛋白受体mRNA表达水平相对于单纯苯代谢物处理细胞均有显著提高.结论 苯代谢物可抑制K562细胞转铁蛋白受体的表达,5-aza-CdR可以从转录水平逆转苯代谢物对转铁蛋白受体在K562细胞表达的抑制作用,提示DNA甲基化可能参这一过程；转铁蛋白受体的表达抑制会影响细胞铁的摄入,从而影响血红素合成,继而抑制血红蛋白合成影响红系分化.
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