【摘 要】
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目的 对异种移植候选供体宁乡猪携带的内源性逆转录病毒进行调查分析,为评价从猪到人异种移植中的生物安全性提供依据.方法 从宁乡猪保种群中随机采集22头个体的血样标本
【机 构】
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410013长沙,中南大学湘雅三医院细胞移植与基因治疗研究所
【出 处】
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第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)
论文部分内容阅读
目的 对异种移植候选供体宁乡猪携带的内源性逆转录病毒进行调查分析,为评价从猪到人异种移植中的生物安全性提供依据.方法 从宁乡猪保种群中随机采集22头个体的血样标本,应用PCR技术分别对这些个体基因组中猪内源性逆转录病(porcine endogenous retrovirus,PERV)env-A,env-B,env-C基因及线粒体基因CoⅡ进行扩增,明确宁乡猪种群携带PERV的亚型；RT-PCR分别扩增PERV pol,gag基因,了解PERV是否具有转录活性；为进—步探索宁乡猪基因组中PERVA,-B的序列变异及其特性,在PERV env序列上游设计一对PERV-A,-B共用引物,分别用高保真酶从3头不同个体中PCR扩增1.8 kb PERV env序列,然后,将PCR产物克隆至pUCm-T载体,PCR扩增法鉴定阳性克隆,并分别用限制性内切酶印n Ⅰ和Mbo Ⅰ对所扩增的PCR产物进行酶切鉴定,测序分析不同酶切图谱的阳性克隆；最后,用两对不同的引物对PERV-C阳性的个体中的PERV-A/C重组序列进行PCR扩增,分析这些个体中是否存在PERV-A/C重组.
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