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2003年,欧盟化妆品规范第七次修订禁止了所有急性毒理学动物实验,促进人体皮肤体外模型的验证。目前已有三种体外皮肤模型得到了ECVAM科学顾问委员会的认证:SkinEthicTM,EpiDermTM和EpiSkinTM。然而,不同种族人群间的急性皮肤刺激反应的差异还尚不明确。本研究成功构建了中国汉族人体外皮肤模型（EpiKutis）,并对其用于化妆品安全性、功效性测试进行了研究。EpiKutis采用12岁以下汉族儿童包皮组织分离的角质形成细胞为种子细胞,利用组织工程专利技术培养而成,通过组织学、免疫组织化学、透射电镜技术及脂质分析对其进行模型表征评价,并通过Triton X-100 ET50评估模型屏障功能,从而建立测试的参数。EpiKutis的组织学结构与天然皮肤高度一致,具有基底层、棘层、颗粒层及角质层的复层化结构。免疫组织化学染色结果显示,CK14,Ki67,Integrin-beta1在基底层表达,表皮分化标记蛋白如CK10、外壳蛋白、丝聚蛋白在基底层上各层呈现阳性,与天然皮肤有着一致的分化模式。透射电镜下可见角质透明颗粒、被膜颗粒及半桥粒等结构。EpiKutis与中国汉族人的天然皮肤有着相似的脂质组成成分,说明模型具有与天然皮肤相似的脂质屏障。Triton X-100 ET50表明该模型具有合适的皮肤屏障功能,能够阻碍测试化学品的快速渗透。参考OECD TG439指导原则,我们对20种标准化学品进行皮肤刺激性实验的预评估,测试结果表明EpiKutis模型的皮肤刺激性预测准确率达到85%。此外,我们还就化妆品配方进行ET50的测试,结果同临床测试结果进行相关性分析,说明EpiKutis体外测试的结果与临床结果具有较高的一致性。除了对化学品、化妆品的皮肤刺激性测试之外,我们还利用EpiKutis作为紫外损伤研究模型。模型通过UVA/B的辐照作用,检测TNF-alpha,IL-1,IL-6,IL-8等促炎因子说明辐照保护剂具有抗炎,保护模型屏障的功能。该模型也可以发展衍生成为3D的光毒性测试模型等方法。EpiKutis与天然皮肤有着相似的结构和屏障功能,对于化学品刺激性的预测结果准确度高,与临床结果相关性好。不同种族人群对于不同的化学品可能会存在不同的测试结果,其机制有待更深入的研究。除应用于安全性评价之外,EpiKutis也可广泛应用于化妆品原料或成品的功效检测及其他皮肤病研究。