【摘 要】
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目的 构建一株高效表达入骨形成蛋白2 (hBMP2)的基因工程菌株,对包涵体进行复性,并对复性后的蛋白进行纯化.方法 利用基因工程方法 将BMP2基因片段与pET28质粒载体相连,
【机 构】
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山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东省多糖类药物工程实验室多糖类药物发酵与精制国家地方联合工程实验室山东济南250101;山东福瑞达医药集团公司山东济南250101
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目的 构建一株高效表达入骨形成蛋白2 (hBMP2)的基因工程菌株,对包涵体进行复性,并对复性后的蛋白进行纯化.方法 利用基因工程方法 将BMP2基因片段与pET28质粒载体相连,构建BMP2大肠杆菌表达系统.发酵菌体超声破碎后收集包涵体,经洗涤液反复洗涤3次后用裂解液将包涵体裂解为终浓度35 mg/mL.采用稀释复性法进行复性,复性液中蛋白终浓度为750 mg/L,常温复性4天,非还原SDS-PAGE电泳检测复性情况,并采用HiTrap Heparin HP进行纯化.结果 rhBMP2在大肠杆菌中以无活性的包涵体的形式表达,通过高密度发酵,1L发酵罐中rhBMP2表达量可达20g/L.采用稀释法复性,蛋白复性率大于40％.复性液采用亲和层析一步纯化,利用NaC1进行阶段洗脱将单体和二聚体分离,二聚体蛋白纯度达到95％以上.结论 构建了一株表达量高的基因工程菌,复性方法简单且无需对包涵体进行纯化,蛋白复性浓度高,纯化方法简便,大大降低了工业生产成本.
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