磁性亲和分离技术是将亲和分离的高特异性特点与磁性材料的磁可导向性相结合的一种简单、快速的分离技术,在蛋白质、核酸和细胞等生物分子的分离、纯化和免疫测定中具有广阔的应用前景[1]。显色生物分析(Colorimetric bioassay)具有成本低,简单、便于实现肉眼观测,无需昂贵的仪器和特殊培训的人员等优点,在生物免疫测定中扮演着十分重要的角色。到目前为止,现有的液相显色分析方法主要有酶催化特定底物显色法[2]和基于金纳米粒子(Gold nanoparticles,AuNPs)的显色[3]。近几年来,基于AuNPs 的显色分析方法已经引起了广泛的兴趣,按照机理大致可分为交联法和非交联法,它们都是基于AuNPs 在团聚和分散状态时的颜色不同来实现待测生物分子的显色分析,主要依赖于AuNPs的光学表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)性质。然而,由于自身信号放大的缺乏,测试灵敏度通常在nM范围,受到了较大的限制。本研究中以凝血酶为模式蛋白分析物,适配体为亲和识别元件,首先利用适配体修饰的磁珠(Aptamer 15-functionalizedmagnetic beads,apt15-MBs)从混合物中将待测蛋白分子富集和分离到磁珠表面,然后加入过量的适配体修饰的AuNPs(Aptamer 29-functionalized AuNPs,apt29-AuNPs),形成三明治复合物,依赖于复合物中AuNPs 催化对硝基苯酚还原褪色来实现凝血酶的无酶化显色生物分析。结果表明,该方法简单、迅速、特异性好,灵敏度较传统的AuNPs 显色法提高了1-2 个数量级,同时也避免了酶的使用。