【摘 要】
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目的:鉴定出一组可能会作为非小细胞肺癌(NSCLC)早期诊断生物标志物的肿瘤相关自身抗体.方法:用20例非小细胞肺癌组织标本(Ⅰ至Ⅳ期)构建了一个噬菌体展示文库.然后用肺癌患
【机 构】
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天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室
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目的:鉴定出一组可能会作为非小细胞肺癌(NSCLC)早期诊断生物标志物的肿瘤相关自身抗体.方法:用20例非小细胞肺癌组织标本(Ⅰ至Ⅳ期)构建了一个噬菌体展示文库.然后用肺癌患者和正常健康对照血清对这个文库进行生物淘洗富集和血清免疫学分析.噬菌体表达蛋白的基因序列确认后,从非小细胞肺癌细胞株和组织标本的基因芯片中可以查找那些读码框内表达蛋白对应的基因表达水平.表达上调的基因编码的噬菌体表达蛋白被选定用于酶联免疫吸附测定(ELISA).进一步用40例非小细胞肺癌患者和36例健康对照组血清来检测这些肿瘤相关自身抗体的有效性.逻辑回归模型和弃一交叉验证法被用来评估单一和联合标志物预测肺癌能力,而后一种统计方法也用于分析这些标志物与疾病分期的关系.结果:1.初步挑选了148个肿瘤相关的噬菌体表达克隆,其中35个是单一的读码框内表达的噬菌体蛋白.2.经过基因芯片分析后,有4个蛋白质被选定用于进一步研究.3.Affymetrix基因芯片数据库表明,这4个噬菌体表达蛋白在非小细胞肺癌细胞株中的Mrna转录水平均高于正常的人支气管上皮细胞株(HBECs)(P＜0.05).4.Illumina基因片数据库显示,编号96-12和BT9-3的蛋白在非小细胞肺癌细胞株和83例非小细胞肺癌组织样本中的基因表达水平均显著高于正常的人支气管上皮细胞株/小支气管上皮细胞株(HSAECs)和83例配对良性肺组织(P＜0.05).5.逻辑回归分析这4个标志物联合预测非小细胞肺癌的灵敏性达47.5％,特异性达97.3％,而弃一交叉验证法检验得到66.7％的敏感性和60.0％特异性.6.受试者工作特征曲线分析和弃一交叉验证法均表明,4种抗体联合检测比任何单一抗体标志物能产生更好的预测准确度.弃一交叉验证还表明,4个联合标志物对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 和Ⅳ期非小细胞肺癌诊断的准确性分别达到63.6％,62.5％,82.4％和50％.结论:(1)本研究证明了肺癌患者血清中自身抗体的存在;(2)成功筛选鉴定出4个可能与早期肿瘤产生的特异性自身抗体有关的肺癌相关蛋白,并且这组肿瘤相关的自身抗体可能会作为非小细胞肺癌(NSCLC)早期诊断的生物标志物.
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