【摘 要】
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目的:探究人外周血来源的树突状细胞调控肝癌细胞自噬及其相关机制,为免疫学治疗奠定理论基础。方法:采用Ficoll密度梯度离心法获取人外周血中的单个核细胞,通过IL-4、GM-CSF和IL-1β诱导其为树突状细胞DCs,形态学、流式细胞术及细胞因子分泌功能试验鉴定树突状细胞;通过0.3um孔径transwell系统将树突状细胞与HepG2细胞共培养48h,CCK8实验检测共培养后HepG2的活性,w
【出 处】
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第十四届全国免疫学学术大会论文摘要汇编
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目的:探究人外周血来源的树突状细胞调控肝癌细胞自噬及其相关机制,为免疫学治疗奠定理论基础。方法:采用Ficoll密度梯度离心法获取人外周血中的单个核细胞,通过IL-4、GM-CSF和IL-1β诱导其为树突状细胞DCs,形态学、流式细胞术及细胞因子分泌功能试验鉴定树突状细胞;通过0.3um孔径transwell系统将树突状细胞与HepG2细胞共培养48h,CCK8实验检测共培养后HepG2的活性,western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ的表达,通过qRT-PCR检测共培养后DC细胞IL-2、IL-12、IL-10、IFN-γ的表达,通过ELISA检测共培养后DCs细胞上清IL-12、IFN-γ分泌变化。结果:诱导获得DCs具有典型的树状突起,流式检测符合DCs表型:CD14表达降低,CD83表达升高,CD80表达升高,CD86表达升高;CCK8结果显示:共培养48h后HepG2的生物活性为单独培养的0.62倍（p＜0.01）,western blot结果显示:共培养后HepG2表达的LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ为单独培养的3.3倍和1.8倍（p＜0.01）,qRT-PCR结果显示:共培养后DC细胞IL-2、IL-12、IL-10、IFN-γ的表达分别为单独培养DC的0.26、0.0021、0.003、0.234倍（p＜0.01）,ELISA结果显示:共培养后DC细胞上清IL-12、IFN-γ的分泌量分别为单独培养DC的0.6、0.53倍（p＜0.01）。结论:在transwell共培养体系中HepG2几乎完全抑制了DC表达IL-10和IL-12的能力,部分抑制了DC表达IL-2和IFN-γ的能力,但DC仍能够通过分泌IL-12、IL-2、IFN-γ的方式介导HepG2的自噬。提示DC能够作为一种优越的潜在的抗肿瘤细胞在固有免疫抗肿瘤及瘤苗制备中发挥重要的作用。
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