微管依赖性自噬在镉引起的神经细胞线粒体损伤中的作用

来源 :中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lb_super
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  [目的]研究自噬(autophagy)通过微管(microtubules)依赖性途径在镉致大鼠大脑皮质神经细胞线粒体损伤中的保护作用.[材料和方法]处死怀孕18天的SD大鼠,取18日龄的SD大鼠胎鼠的大脑皮质神经细胞,经neubasal培养基培养6天后,通过20 μmol/L镉处理0,2,4,6,8,12,24小时,通过Westernblo检测自噬标志性蛋白LC3,p62的表达,镉单独或与紫杉醇联合处理神经细胞12小时检测微管聚合蛋白ace-tubuline,tau磷酸化水平以及自噬表达相关蛋白LC3,Atg5的表达, 用免疫荧光技术检测LC3与微管的表达与分布.在此基础上, 通过添加自噬的抑制剂3-MA,利用荧光定量技术检测自噬中关键调节蛋白基因Becline1的表达及用流式细胞仪细胞线粒体膜电位,用试剂盒检测ATP含量的变化,最后通过电镜观察细胞中线粒体的形态学变化.[结果]镉诱导神经细胞自噬在6小时达到最高水平,在12小时有明显下降,镉与紫杉醇联合处理12小时与镉单独处理组相比,自噬水平有明显上升(P<0.01),线粒体膜电位上调,ATP含量增加.添加3-MA后能够显著降低自噬水平,同时进一步降低线粒体膜电位以及ATP的含量.[结论]镉能够诱导大鼠大脑皮质神经细胞自噬,镉引起的细胞微管损伤能够影响自噬水平进而导致线粒体损伤,通过添加紫杉醇促进微管聚合,能够进一步提高自噬水平,从而减轻镉所导致的细胞氧化损伤,提示微管依赖性的自噬在镉引起的大鼠大脑皮质神经细胞线粒体损伤中具有一定的保护作用.
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