【摘 要】
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捕食线虫真菌是线虫的重要天敌之一,它们对于维持土壤生态环境中线虫种群的动态平衡发挥着十分重要的作用.捕食线虫真菌寡孢节丛孢是研究真菌与线虫相互作用的代表性菌株,前期的测序结果表明寡孢节丛孢的基因组中存在大量功能未知的基因和蛋白,为了进一步研究这些功能未知的基因和蛋白,筛选和寡孢节丛孢生长、产孢、捕器形成和致病性等密切相关的功能基因,通过限制性内切酶介导的转化技术对寡孢节丛孢进行了转化,获得37 株
【机 构】
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云南大学,省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室,云南昆明650091
【出 处】
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第六届全国农业微生物研究及产业化研讨会、第十五届全国杀虫微生物学术研讨会、第十一届全国虫生真菌学术研讨会
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捕食线虫真菌是线虫的重要天敌之一,它们对于维持土壤生态环境中线虫种群的动态平衡发挥着十分重要的作用.捕食线虫真菌寡孢节丛孢是研究真菌与线虫相互作用的代表性菌株,前期的测序结果表明寡孢节丛孢的基因组中存在大量功能未知的基因和蛋白,为了进一步研究这些功能未知的基因和蛋白,筛选和寡孢节丛孢生长、产孢、捕器形成和致病性等密切相关的功能基因,通过限制性内切酶介导的转化技术对寡孢节丛孢进行了转化,获得37 株抗性标记稳定遗传的突变株.与野生株相比,不同的突变株在表型方面都有明显变化.其中,突变株X5、X28 和A5 的产孢数量分别增加了10.8、5.5 和2.25 倍,而X13、A1、A2和A4 的产孢能力显著下降；突变菌株的产捕器能力也有变化,其中X13 不能产生捕器.利用染色体步移技术,将突变株X5 和X13 中的外源载体随机插入位点的侧翼序列分离,并确认了插入位点在基因组上的位置.其中,突变株X13 的插入位置为基因78g287 和78g288 之间；突变株X5 的插入位置为基因76g273和76g274 之间.通过RT-PCR 分析发现,基因76g274 在X5 突变株的转录水平上调,而76g274 的转录水平没有变化,说明潮霉素基因的插入引起了76g274 转录水平的变化.为了进一步研究76g274p 在寡孢节丛孢中的功能,我们首先通过Interproscan等软件对76g274p 的功能结构域等进行了预测,发现76g274p 可能是一个潜在的锌指蛋白型转录因子.为进一步验证该蛋白的功能,在酿酒酵母中异源表达了融合蛋白Ao-76g274：：GFP 进行功能定位.结果表明该蛋白的作用区域为细胞核内,进一步证实了其很可能就是一个转录因子,且含有未被报道过的核定位序列.同时我们通过同源重组技术对基因76g274 进行了敲除,突变菌株△c 的表型分析发现,△c 的生长和形成捕器都没有差异,然而△c 的产孢数量减少了70.1％,进一步的分析发现,△c 中大部分的产孢调控基因(如AbaA、FlbC、FlbD 和FluG)在产孢初期的表达水平显著下调.以上结果表明,76g274p 是一个C2H2 类型的转录因子,它正调控寡孢节丛孢分生孢子的产生.
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