【摘 要】
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穿膜肽(CPPs)是一种阳离子短肽,通过与细胞膜上的负离子相互作用,从而高效将药物递送到细胞内.反式转录激活因子(TAT)是一种常用的穿膜肽,且因为其具有低毒、高效性而成为研
【机 构】
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广东工业大学艾仑康尼抗肿瘤实验室广州药物研究所广东工业大学艾仑康尼抗肿瘤实验室;广东五邑大学广东工业大学艾仑康尼抗肿瘤实验室;美国罗格斯大学药学院;SusanLehmanCullman癌症研究实验室
【出 处】
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第四届吴宪吴瑞国际学术研讨会、第九届全国医学生物化学与分子生物学、第六届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术讨论会
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穿膜肽(CPPs)是一种阳离子短肽,通过与细胞膜上的负离子相互作用,从而高效将药物递送到细胞内.反式转录激活因子(TAT)是一种常用的穿膜肽,且因为其具有低毒、高效性而成为研究的热点.然而,近年研究表明,TAT输送药物的能力受限于药物的大小.为了能够改善TAT的性能,使其可以更高效地输送大蛋白药物,我们设计并组装了一种新型的药物递送载体CTB5/EGFP-CTA2-TAT.在这里,模拟霍乱毒素侵染细胞原理,结合霍乱毒素B亚单位(CTB)的五聚体(CTB5)可以与鼻粘膜上富含的神经节苷脂GM1结合,并引导霍乱毒素A2亚基(CTA2)进入细胞的作用机制,构建新型的递药载体从而高效提高TAT的靶向性和穿膜活性.本研究中,同时构建了质粒petduet-CTB和质粒pet22b-EGFP-CTA2-TAT.通过镍琼脂糖分别纯化得到蛋白CTB和EGFP-CTA2-TAT,纯化的蛋白分别用组氨酸标签的一抗和GFP的一抗分别进行western blot鉴定.纯化后的蛋白CTB和EGFP-CTA2-TAT经过体外复性、非变性电泳和分子筛型HPLC鉴定,表明六聚体蛋白CTB5/EGFP-CTA2-TAT组装成功.嵌合蛋白CTB5/EGFP-CTA2-TAT经100kda的超滤管纯化和浓缩,通过非变性电泳和westem blot鉴定,进一步验证组装和纯化成功.通过与神经节苷脂GM1结合能力测试以及荧光强度测定,表明嵌合蛋白CTB5/EGFP-CTA2-TAT可以保持CTB5和EGFP的生物活性.我们的研究表明,在体外可以纯化并组装得到嵌合蛋白CTB5/EGFPCTA2-TAT,同时该嵌合蛋白保持其高度的生物活性.另外,本研究得到的嵌合蛋白可作为一种递药载体,协助大蛋白药物高效进入细胞内.
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