一种准确计数拟穴青蟹血淋巴中微生物菌群丰度的方法

来源 :第十届世界华人虾蟹养殖研讨会暨2016年中国河蟹产业发展高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haohaia9
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  微生物普遍存在于健康的甲壳动物血淋巴中,而对血淋巴中微生物菌群丰度的计数缺乏准确的方法.本研究开发一种基于荧光显微术和过滤原理来计数甲壳动物血淋巴微生物丰度的方法,该方法用荧光显微镜直接观察计数微生物,并可以有效去除血淋巴中的血细胞对微生物细胞计数的干扰.与目前报道较多的微生物平板菌落计数法和稀释培养计数法相比具有更高的准确性.本研究以健康拟穴青蟹为对象,为了减少外界环境及不同的食物来源对青蟹血淋巴微生物的干扰,采用特制的养殖盒(每个盒子一只青蟹),对青蟹饲喂灭菌的红肉河蓝蛤和田螺.利用1ml无菌注射器抽取青蟹第三步足基节膜处血淋巴,通过固定、过滤、染色、制片、荧光显微镜观察.此法也存在滤膜和血淋巴对微生物直接计数有影响,故对血淋巴微生物计数时需计算微生物总的的损失率.初步结果表明,①青蟹血淋巴中的微生物丰度为3.8-6.9×104 cells/mL,②此方法的微生物细胞总的损失率为22.66%.本研究比较准确计数血淋巴微生物的数量,有助于构建青蟹的微生物组数据集,为后续研究青蟹血淋巴微生物菌群的功能奠定基础.
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