【摘 要】
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目的通过金属螯合亲和层析的方法获得高纯度人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)蛋白。方法采用蛋白抽提试剂破菌方法抽提包涵体蛋白,初步纯化后在变性条件下用组氨酸标
【机 构】
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重庆第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤复合伤国家重点实验室;
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目的通过金属螯合亲和层析的方法获得高纯度人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)蛋白。方法采用蛋白抽提试剂破菌方法抽提包涵体蛋白,初步纯化后在变性条件下用组氨酸标签结合树脂进行亲和层析,透析方法复性,对纯化样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western免疫印迹、肽指纹谱鉴定(peptide mass fingerprinting)。结果EOLA1蛋白在大肠杆菌中表达主要以包涵体形式存在,初步纯化的包涵体中蛋白含量为75%以上,亲和层析纯化后获得的蛋白纯度高达90%以上,肽质量指纹谱分析目的蛋白与理论蛋白肽段覆盖率为32%。结论所应用的EOLA1蛋白纯化和复性方法简便有效,能够获得足量纯化的EOLA1蛋白,为下一步制备EOLA1单克隆抗体及该基因进行功能研究打下基础。
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