【摘 要】
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猪传染性胸膜肺炎(PIPS)是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种猪高度接触性呼吸道传染病，是猪急性呼吸道疾病发生的重要原因。本文以探讨APP两种在体内表达的蛋白ApxIVA(胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素IVA)和TbpB(运铁蛋白结合蛋白B)对灭活疫苗免疫效果的影响为目的。研究从分析基因序列特性开始，采用PCR方法成功扩增APP血清1型apcIVA基因5端两个特征性氨基酸序列(N端疏水性区域和中
【机 构】
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四川农业大学动物医学院 动物传染病与基因芯片实验室 四川省动物疫病与人类健康重点实验室,四川 雅安 625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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猪传染性胸膜肺炎(PIPS)是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种猪高度接触性呼吸道传染病，是猪急性呼吸道疾病发生的重要原因。本文以探讨APP两种在体内表达的蛋白ApxIVA(胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素IVA)和TbpB(运铁蛋白结合蛋白B)对灭活疫苗免疫效果的影响为目的。研究从分析基因序列特性开始，采用PCR方法成功扩增APP血清1型apcIVA基因5端两个特征性氨基酸序列(N端疏水性区域和中部乙酰化位点区域)的编码序列，构建这两段序列的表达载体apxIVA1-pET32a和apxIVA2-pET32a。将所构建表达载体和实验室前期构建并鉴定tbpB-pET32a载体分别转化表达宿主菌大肠杆菌BL21，在0.6mmol/L IPTG浓度条件下诱导3h表达重组蛋白rApxIVA1、rApxIVA2和rTbpB。Western-blot分析表明rApxIVA1和rTbpB具有良好的抗体反应原性，rApxIVA2的抗体反应原性很弱。
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对猪链球菌ZKHY株的谷氨酸脱氢酶基因(gdh)进行克隆和序列分析，为进一步研究其功能打下基础。以zKHY的基因组DNA为模板，采用PCR方法扩增出谷氨酸脱氢酶基因片段，克隆于pMD-18T载体，构建成载体pMD-18T-gdh，转化宿主菌DH5a中进行筛选鉴定和序列测定。测序结果与GenBank已登录序列进行核苷酸和氨基酸的同源性分析。成功地克隆了猪链球菌ZKHY株的谷氨酸脱氢酶基因，序列分析显
设计并合成一对扩增2型猪链球菌CPS基因的特异性引物，以猪2型链球菌福建株DNA为模板，筛选最佳反应条件，建立检测CPS2J基因的PCR方法，并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下：应用该方法对猪2型链球菌福建株和标准阳性株进行扩增，均获得与预期大小一致的675bp特异性目的片段，而对8株非2型猪链球菌的扩增结果均呈阴性;敏感性测定最低可检出100cfu细菌量或50pg细菌DNA
根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZ_ABKM01000005，设计一对特异性引物，以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板，通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段。将其进行T-A克隆，构建pETD15质粒并进行序列测定和分析。结果表明D15基因含有一个2418bp的开放阅读框，编码805个氨基酸。与D15参考基因序列及其推导的氨基酸序列比较，同源性分别为99.9％和99.8％。序列
为调查闽西地区猪增生性肠炎发病情况，运用PCR法对2008年龙岩学院动物医学研究所接诊的6-20周龄腹泻病例进行了胞内劳森氏菌检测。结果表明，闽西地区猪场普遍存在PPE感染，被调查的8个猪场全部呈阳性，6-20周龄猪感染率为30.0％-57.1％，其中6-10周龄猪感染率达到54.2％，11-20周龄猪阳性率为30.7％.
目的：构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)的apx ⅠC基因与apx ⅡC基因缺失突变弱毒菌株APP85，为最终研制出APP的基因工程菌苗奠定基础。方法：以标准菌株APP259中apxⅠC基因与apxⅡC基因为目的缺失基因，根据APP Ⅰ型菌apx基因组序列，利用软件设计分别扩增apxⅠCA上下游同源臂以及apxⅡCA上下游同源臂引
为在没有基因芯片点样仪和扫描仪的诊断实验室操作低密度DNA反向杂交检测，将已建立的玻片为基质的芯片检测方法转换成膜基质反向斑点杂交。将玻片为基质的芯片所用25-30 mer探针修改加长到30-38mer,点于0.2μm孔径尼龙膜。扩增23SrRNA基因片段的2对PCR引物序列不变，下游引物改用地高辛标记，目标细菌DNA在常规PCR后与膜上探针杂交，结果初步证明探针特异性好，23S rRNA基因反向
目的：构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白)，并检测其是否具有自身激活及毒性作用。方法：从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA，用PCR方法获得omp，克隆pGBKT7载体上，酶切鉴定及序列分析，并检测pGBKT7-omp在酵母双杂交系统中的自激活和毒性作用。结果：实验成功构建了诱饵质粒载体pGBKT7-omp，并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用
将真核表达空质粒pVAx1转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500株，构建成重组菌c500(pVAX1)，通过体外培养和体内接种的方法，研究该真核表达质粒在体外和体内的稳定性。将重组菌C500(pVAX1)分别以不同剂量口服接种雏鸡，并在雏鸡体内传代接种的方法，研究该重组菌对雏鸡的安全性。结果显示重组菌在体外培养过程中，所携带质粒的重组菌在有抗性选择压力条件下传代过程中存在一定的稳定性。在体内接种过程中，粪
为探讨分离之河南滑县、武陟等12个地域的猪源肠球菌的亲缘关系，采用对其16S rDNA基因的RFLP分析、序列分析、及系统进化树的构建等方法，对这12株疑似猪源肠球菌进行了研究：结果显示：12株分离株均与肠球菌同源性最高，同源率达98.1％-100％;而与猪链球菌同源率最高才达85.5％，且进化树中，12株菌株均位居与猪链球菌并列的肠球菌主干分支中。HandⅢ，XbaⅠ，ECORⅠ分别对这12株球