【摘 要】
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目的：研究Wnt4对瘢痕成纤维细胞的作用,初步探讨其潜在作用机制.方法：体外分离培养人增生期瘢痕组织来源成纤维细胞,取3-6代细胞用于实验.体外实验分为四组,分别是瘢痕细胞
【机 构】
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第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科·全军烧伤中心 西安710032
【出 处】
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第十届全国烧伤救治专题研讨会暨福建省第八次烧伤外科学术研讨会
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目的：研究Wnt4对瘢痕成纤维细胞的作用,初步探讨其潜在作用机制.方法：体外分离培养人增生期瘢痕组织来源成纤维细胞,取3-6代细胞用于实验.体外实验分为四组,分别是瘢痕细胞对照组、TGF-β 1组、Wnit4组、TGF-β 1+Wnt4组,根据实验分组采用TGF-b1和Wnt4作用瘢痕成纤维细胞48h,采用real-timePCR,western blot,细胞免疫荧光法检测Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β 1、Smad3、p-Smad3的表达水平,并采用成纤维细胞凝胶收缩实验观察各组凝胶收缩程度变化,测量凝胶面积；在体实验分为正常对照组、兔耳瘢痕组、兔耳瘢痕+Wnt4组,测量瘢痕增生指数,通过mason染色观察胶原纤维增生表达水平变化.结果：体外实验显示TGF-β 1作用后48h,real-time PCR结果显示Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β 1的mRNA表达水平显著上调(p＜0.01),western blot显示Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β 1蛋白表达水平同样显著上调,Smad3表达水平无明显变化,但p-Smad3表达水平显著上调.成纤维细胞收缩实验显示,TGF-β 1组凝胶在48h后面积较对照组显著缩小(p＜0.01),Wnt4组凝胶面积与对照组相比并无明显差异,但显著大于TGF-β 1组凝胶收缩面积(p＜0.01).在体实验结果显示,给予Wnt4作用后,兔耳瘢痕增生指数显著低于瘢痕对照组(p＜0.01),mason染色显示,兔耳瘢痕组织内胶原含量显著增多,胶原形态粗大,而给予Wnt4作用后,胶原含量明显减少,且胶原纤维形态变细.讨论：TGF-β 1自分泌放大机制使成纤维细胞过度激活,是增生性瘢痕形成的重要机制之一,Wnt4可抑制TGF-β 1对瘢痕成纤维细胞的活化,表达α-SMA,合成和分泌Ⅰ型胶原,从而抑制了瘢痕成纤维细胞的收缩和分泌细胞外基质.这种抑制效应可能与Wnt4通过抑制Smad3的激活进而抑制了TGF-β 1的自分泌放大机制来实现的.
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