杨树SSR荧光标记反应体系及反应条件优化

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以响叶杨、银白杨以及响叶杨×银白杨F1代94个单株为试材,利用TP-M13自动荧光检测系统,通过正交设计直观分析法优化杨树SSR荧光标记技术中PCR反应体系和条件。通过实验确定10μl反应体系最佳因子组合为:Taq聚合酶:0.75U;Mg2+:2.0mmol/L;dNTP:0.15mmol/L;引物(R&M13):0.20μmol/L;引物F:0.05μmol/L。最佳PCR反应程序为:95℃2min;94℃30s,59℃30s,72℃4s,30个循环;94℃30s,53℃30s,72℃45s,8个循环;72℃延伸30min;4℃保温。并利用此反应体系和程序,对F1代94个单株进行了SSR反应,证明了其可行性。
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