【摘 要】
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目的 探索通过雷帕霉素调控自噬对脊髓损伤大鼠脊髓神经元凋亡的作用及机制.方法 将36只SD大鼠随机分为三组,每组12只.假手术组行椎板切除术但不损伤脊髓,生理盐水组和雷帕霉素组行椎板切除并采用改良Allens击打法损伤T10脊髓.术后1d、3d、7d、14d用斜板实验、改良Tarlov评分及运动诱发电位监测评价大鼠神经功能,术后14d采用免疫组化双标染色检测神经元自噬水平并采用qRT-PCR和蛋白
【出 处】
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中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会
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目的 探索通过雷帕霉素调控自噬对脊髓损伤大鼠脊髓神经元凋亡的作用及机制.方法 将36只SD大鼠随机分为三组,每组12只.假手术组行椎板切除术但不损伤脊髓,生理盐水组和雷帕霉素组行椎板切除并采用改良Allens击打法损伤T10脊髓.术后1d、3d、7d、14d用斜板实验、改良Tarlov评分及运动诱发电位监测评价大鼠神经功能,术后14d采用免疫组化双标染色检测神经元自噬水平并采用qRT-PCR和蛋白印迹检测自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1mRNA和蛋白的表达.结果 1d、3d、7d、14d生理盐水组和雷帕霉素组术后斜板实验(28.14±2.48)°、(30.65±3.58)°、(34.85±4.12)°、(37.62±4.73)°；(29.02±2.64)°、(36.37±3.87)°、(43.28±4.39)°、(50.06±4.52)°和改良Tarlov评分(0.23±0.12)分、(0.96±0.22)分、(1.17±0.28)分、(1.73±0.35)分；(0.29±0.15)分、(1.34±0.23)分、(2.26±0.30)分、(3.68±0.41)分,均较假手术组显著降低,之后均有增加趋势,均自3d开始两组表现出统计学意义(P＜0.05).MEP检测生理盐水组和雷帕霉素组潜伏期与波幅(17.08±0.39)ms、(13.85±0.31)ms、(9.26±0.23)ms、(8.24±0.25)ms；(1.86±1.05)μv、(2.37±1.26)μv、(3.84±1.75)μv、(4.27±1.49)μv和(12.63±0.34)ms、(9.88±0.29)ms、(7.59±0.22)ms、(6.48±0.21)ms；(3.75±1.88)μv、(4.72±2.14)μv、(5.43±2.29)μv、(5.96±2.31)μv两组术后潜伏期明显延长且波幅降低,自1d开始潜伏期逐渐缩短而波幅增高,雷帕霉素组与生理盐水组存在统计学意义(P＜0.05).免疫组化双标染色共聚焦显微镜检测LC3阳性神经元荧光强度,假手术组为103.26±5.49,生理盐水组121.85±8.37,雷帕霉素组156.17±10.62；同时qRT-PCR检测LC3和Beclin-1的mRNA相对表达量,生理盐水组为1.28±0.09和1.23±0.12,雷帕霉素组为1.74±0.10和1.51±0.14；蛋白印迹检测LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白的表达水平也是雷帕霉素组最高,均与生理盐水组存在统计学意义(P＜0.05).结论 有效调控自噬可通过抑制凋亡而促进脊髓神经功能的修复.
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