【摘 要】
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近年来,狂犬病在中国西北及北部省份频繁发生,已成为狂犬病流行的另一特征.2013年,内蒙古呼和浩特市大青山野生动物园20余只黇鹿爆发狂犬病.采取发病鹿脑组织进行了直接免疫抗体法(DFA)及RT-PCR法对该病进行了诊断.取20％病鹿脑组织悬液进行了小鼠颅内接种(i.c.)分离病毒,并连续传6代,发现病毒在第4代即已"固定",将病毒命名为IMDRV-13.该病毒在MNA细胞及BSR细胞上的半数组织细
【机 构】
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中国农业科学院特产研究所特种动物分子生物学省部共建国家重点实验室,吉林长春130112 中国兽医药
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近年来,狂犬病在中国西北及北部省份频繁发生,已成为狂犬病流行的另一特征.2013年,内蒙古呼和浩特市大青山野生动物园20余只黇鹿爆发狂犬病.采取发病鹿脑组织进行了直接免疫抗体法(DFA)及RT-PCR法对该病进行了诊断.取20％病鹿脑组织悬液进行了小鼠颅内接种(i.c.)分离病毒,并连续传6代,发现病毒在第4代即已"固定",将病毒命名为IMDRV-13.该病毒在MNA细胞及BSR细胞上的半数组织细胞感染量(TCID50)分别可达105.43和105.46,神经亲和指数为1.07.此外,该固定毒株在成年小鼠肌射(i.m.)攻毒的半数致死量(LD)为104.50,致病性指数为0.12,与之相比,标准攻毒毒株CVS-24的神经亲和指数为和致病性指数分别为1.23和0.13.随后,我们通过RT-PCR法,将IMDRV-13的基因组分9个连续重叠片段进行了克隆,通过5RACE及3RLM-RACE对基因组5及3末端序列进行了扩增,并拼接获得该毒株完整的基因组序列(GenBank登陆号为KJ564280),该基因组由11924个核苷酸组成,G+C含量为44.66％,与其他RABV毒株具有相似的基因组结构,与其他42株RABV基因组序列的一致性为80.4-99.5％,且与其他两株内蒙古分离株CNM1101C和CNM 1104D具有较高的序列一致性(均为99.0％).系统发育分析发现,IMDRV-13属于犬狂犬病毒,China-Ⅰ谱系.此外,该病毒株G蛋白上抗原位点Ⅲ的一个点突变I338T导致该位置增加了一个N-糖基化位点(N336),对病毒的致病力和宿主适应性具有潜在的影响.随着更多的狂犬病病毒株在内蒙古的发现,可以推测曾一度主要在南方流行的China-Ⅰ谱系病毒己开始向北扩散至中国的最北端,此外,多个谱系的狂犬病病毒在内蒙古流行,也增加了疫情流行的复杂性和控制的难度.
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