【摘 要】
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中药有效活性成分葛根素、芒果苷具有降血脂、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等多种生理活性,但葛根素、芒果苷水溶性差,生物利用度低,限制了其在临床上的实际应用.利用耐有机溶
【机 构】
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南京工业大学生物与制药工程学院,江苏南京211816
【出 处】
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江苏省生物化学与分子生物学第九届会员代表大会暨第十次学术会议
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中药有效活性成分葛根素、芒果苷具有降血脂、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等多种生理活性,但葛根素、芒果苷水溶性差,生物利用度低,限制了其在临床上的实际应用.利用耐有机溶剂糖苷酶结构修饰葛根素、芒果苷可显著改善其生物活性、溶解度、生物利用度,为天然产物的生物改性提供新的思路与手段.本研究采用来源于自行筛选获得的Arthrobacter arilaitensis NJEM01菌的果糖苷酶,该酶在非水相中以廉价易得的蔗糖为糖基供体,催化葛根素、芒果苷糖基化反应,转化率达90％以上.纯化获得了表观分子量约55 kDa电泳纯果糖苷酶.酶学性质研究表明：该酶最适pH为6.5,在pH5.0～9.0范围内具有较高的稳定性；最适温度为50℃,在50℃以下具有较好的热稳定性,60℃保温2h后仍能保持80％以上的活性；金属离子Ca2+、Ba2+对该酶活力有明显的激活作用,而Fe2+和Cu2+对酶活力有抑制作用；酶在20％(V/V)DMSO、甲醇、乙醇中具有高度稳定性和催化活性,这对于脂溶性天然活性成分的高浓度及高效糖基化反应具有重要意义.根据果糖苷酶的N末端分析与数据库比对分析,设计引物,扩增获得果糖苷酶的全基因,序列长1488 bp,编码495个氨基酸.将目的基因与质粒相连构建表达重组质粒pET22b-fru6,在E.coli BL21(DE3)中实现了可溶性表达,表达的果糖苷酶占总蛋白的60％以上,酶活是野生酶的10倍以上,这为果糖苷酶Fru6应用于工业化生产奠定了良好的基础.
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