【摘 要】
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蒎烯(pinene)是一种重要的天然单萜类平台化合物,被广泛应用于合成高密度可再生燃料、药理活性、香料和芳香醇等产品,在军事、医药、农业、工业和家用等领域均有重要的应用前景.利用合成生物学概念,将来源于酵母和粪肠球菌异源杂合MVA代谢途径和来源于北美巨冷杉(Abies grandis)的牻牛儿焦磷酸合酶(GPPS)和蒎烯合成酶(PS)基因序列共同导入大肠杆菌中并催化表达,构建含完整的蒎烯代谢途径的
【机 构】
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安徽大学物质科学与信息技术研究院 合肥 230601;军事科学院军事医学研究院 北京 100850
【出 处】
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中国生物工程学会第十二届学术年会暨2018年全国生物技术大会
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蒎烯(pinene)是一种重要的天然单萜类平台化合物,被广泛应用于合成高密度可再生燃料、药理活性、香料和芳香醇等产品,在军事、医药、农业、工业和家用等领域均有重要的应用前景.利用合成生物学概念,将来源于酵母和粪肠球菌异源杂合MVA代谢途径和来源于北美巨冷杉(Abies grandis)的牻牛儿焦磷酸合酶(GPPS)和蒎烯合成酶(PS)基因序列共同导入大肠杆菌中并催化表达,构建含完整的蒎烯代谢途径的大肠杆菌工程菌。首先获取蒎烯合成代谢途径中最后两个酶GPPS、PS的基因序列，优化后进行人工全基因合成，再以pET24-a为基础构建GPPS、PS融合表达载体，并将其转化到大肠杆菌中获得工程菌E.hzh02；然后再获取MVA代谢途径相关酶（mvaE、mvaS、ERG12、ERG8、ERG19、IDI）的基因序列，设计引物分别克隆，利用多顺反子模型构建MVA代谢途径，将MVA代谢途径和GPPS、PS融合表达基因共同转化到大肠杆菌中构建完整蒎烯合成代谢工程菌株E.hzh05，摇瓶发酵得到E.hzh02和E.hzh05的蒎烯产量分别为1.86mg/L和19.26 mg/L。综上得出，导入MVA代谢途径到大肠杆菌中可以显著提高蒎烯的产率，为工业生物合成蒎烯奠定了一定的基础。
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