橡胶树红根病菌LAMP检测方法的建立

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为了建立一种快速、高效、准确检测橡胶树红根病菌的技术。本研究以SYBR Green I为指示剂,建立了橡胶树红根病菌即橡胶灵芝菌(Ganoderma pesudoferreum)的环介导等温扩增(LAMP)可视化快速检测方法。根据橡胶树红根病菌特异的线粒体转录间隔区序列设计了4条引物(两条内引物、两条外引物)进行LAMP扩增。对LAMP反应条件和体系进行优化,并进行特异性和灵敏度验证。研究确定最佳反应体系(25μL中模板100ng/μL,外引物F3/B3各为0.2μmol/L,内引物FIP/BIP各为1.2μmol/L,dNTPs为1.4mmol/L,Mg2+为4mmol/L,甜菜碱为0.8mol/L,Bst DNA polymerase为8U/μL,)和反应条件(最佳反应温度64℃,反应1h)。特异性检测结果显示,橡胶树红根病病菌LAMP产物均呈阳性(绿色),而其他病原菌组织LAMP产物均为阴性(橙色)。灵敏度验证结果显示,该体系的DNA的最低检测限为1×10-5ng/μL,是普通PCR的103倍。
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