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目的:
CD15抗原是Lewis血型抗原之一,又称LeX,属细胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs)成员。CAMs是位于细胞表面的糖蛋白,与多种肿瘤的发生、发展密切相关。CD15s抗原是CD15抗原的唾液酸化形式,也属于细胞粘附分子,它是E-选择素的主要配体,它通过结合含有E-选择素的血小板、粒细胞及内皮细胞促进癌灶细胞转移。
细胞粘附分子受多种因素的调节,特别是细胞因子的作用。肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是具有广泛生物学活性的细胞因子,可通过激活细胞内信号通路使胞内储存的细胞粘附分子转移到细胞表面从而使细胞膜表面该分子增加。已有研究表明:TNF-α能够诱导多种肿瘤中CD分子含量上调,如TNF-α能够诱导人胰腺癌细胞株SW-1990细胞表面粘附分子CD44含量上调,从而影响肿瘤细胞迁移等细胞生物学功能。但TNF-α对胃肝肿瘤细胞系中细胞粘附分子CD15及CD15s的影响未见相关报道。本课题旨在研究CD15,CD15s分子在胃,肝肿瘤及正常细胞系中的含量与肿瘤迁移能力的关系,并研究TNF-α对肝癌细胞系CD15,CD15s及ST3Gal家族蛋白的影响。
方法:
应用细胞芯片检测人正常胃粘膜细胞系GES-1、具有转移潜能人胃腺癌细胞系SGC-7901、人淋巴结转移胃癌细胞系HGC-27,人正常肝上皮细胞系L-02、人原发性肝癌细胞系HepG-2、人高转移肝癌细胞系SMMC-7721表面是否存在CD15、CD15s抗原;用Western blot方法验证细胞芯片结果,检测上述几种肿瘤及正常细胞系中CD15及CD15s的含量;同时检测TNF-α对肝癌细胞系中CD15,CD15s及ST3GaL家族蛋白的影响。
结果:
细胞芯片检测发现具有转移潜能人胃腺癌细胞系SGC-7901及人淋巴结转移胃癌细胞系HGC-27表面CD15、CD15s抗原含量明显高于人正常胃粘膜细胞系GES-1;人正常肝上皮细胞系L-02表面CD15、CD15s抗原含量较少;人原发性肝癌细胞系HepG-2及人高转移肝癌细胞系SMMC-7721表面CD15、CD15s抗原含量均较高;Western blot检测发现,CD15在具有转移潜能胃癌细胞系SGC-7901和淋巴结转移性胃癌细胞系HGC-27中含量明显高于正常胃粘膜细胞系GES-1;在高转移性肝癌细胞系SMMC7721中含量明显高于原发性肝癌细胞系HepG-2及正常肝上皮细胞系L-02;CD15s在正常胃粘膜细胞系GES-1、具有转移潜能胃癌细胞系SGC-7901、淋巴结转移性胃癌细胞系HGC-27中含量逐渐增加,在正常肝上皮细胞系L-02、原发性肝癌细胞系HepG-2、高转移性肝癌细胞系SMMC-7721中含量也逐渐增加。与细胞芯片结果基本一致。TNF-α处理的肝癌细胞系中,原发性肝癌细胞系HepG-2的CD15含量较对照组下调(P<0.05),CD15s含量较对照组明显上调(P<0.05),但CD15和CD15s在高转移肝癌细胞系SMMC-7721中含量较对照组无明显改变(P>0.05);经TNF-α处理的HepG-2细胞系的ST3GaL家族蛋白(6种)中ST3GaL-Ⅱ,ST3GaL-Ⅳ表达较对照组明显上调(P<0.05),其它四种ST3Gal-Ⅰ、ST3Gal-Ⅲ、ST3Gal-Ⅴ和ST3Gal-Ⅵ表达无明显变化(P>0.05)。
结论:
1、细胞芯片和Western blot检测部分胃,肝肿瘤及正常细胞系CD15,CD15s抗原,发现CD15,CD15s抗原在人胃癌细胞系SGC-7901,HGC-27中含量高于正常细胞系GES-1,在人肝癌细胞系HepG-2,SMMC7721中含量高于正常细胞系L-02,在人高转移肝癌细胞系SMMC-7721中含量高于人原发性肝癌细胞系HepG-2中的含量。
2、在人原发性肝癌细胞系HepG-2中,TNF-α导致CD15s含量增加同时减少CD15的含量。
3、当人原发性肝癌细胞系HepG-2受TNF-α作用后,CD15s含量增加,CD15含量减少的过程中,ST3GaL-Ⅱ和ST3GaL-Ⅳ蛋白表达增加。